化合物RA-XI在鉴别或辅助鉴别茜草类别或真伪中的应用及鉴别方法与流程

本发明属于物种鉴别及中药材真伪鉴别，具体涉及化合物ra-xi在鉴别或辅助鉴别茜草类别或真伪中的应用及鉴别方法。

背景技术：

1、茜草是我国的传统中药，始载于《神农本草经》，列为上品，原名“茜根”，在《名医别录》、《本草纲目》等著作中均有记载；茜草性状描述为根茎呈结节状，根丛生，粗细不等：根呈圆柱形，略弯曲，长10-25cm，直径0.2-1cm，表面红棕色或暗棕色，具细纵皱纹及少数细根痕，皮部脱落处呈黄红色；质脆，易折断，断面平坦，皮部狭，紫红色，木部宽广，浅黄红色，导管孔多数；茜草味苦，性寒、归肝经，具有凉血，祛瘀，止血，通经；用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹痛，跌扑肿痛。经过调查收集，中国目前有茜草属植物42种，其中特有种23种，药用18种。例如四川中药材标准1987年版就已收载的大叶茜草，亦名茜草，作为四川地方习用品一直在使用；大叶茜草来源于茜草科植物大叶茜草rubiasehumannianapritz.的干燥根茎，主产于我国西南地区，别名川茜草、西南茜草。具有止血化瘀、消炎解毒的功效，用于血热引起的各种出血，便血，尿血，月经过多，蛇伤等症。大茜草为茜草科植物大茜草rubiamagna hsiao-mazz.的根及根茎，分布于四川等地，因其含有大叶茜草素、羟基茜草素、大黄酚等成分，且大叶茜草素含量较高。

2、茜草属植物均以干燥根和根茎入药，性状较为相似，仅通过判断性状，难以区别各药物。且近年来由于野生资源逐渐减少甚至濒危，而茜草多以野生为主，栽培产量低，市场上供不应求，而且茜草野生资源开采后较难恢复，故市场价格逐年升高。利益驱使下部分企业为降低生产成本，多以大叶茜草和大茜草等掺入茜草使用，扰乱了市场秩序，不利于中药行业的健康发展，对药品监管也是一种挑战。大茜草在历代本草记载中无药用历史，在国家和地方标准或炮制规范也未收载，此冒充或掺入茜草使用会造成临床药用安全风险；大叶茜草收载于四川省和重庆直辖市地方标准和炮制规范，属于地方习用药材，但在《中国药典》中未收载，混淆使用或掺入使用可能会降低临床药效。2020版《中国药典》以大叶茜草素(mollugin)和羟基茜草素(purpurin)作为质量标准的指标成分，按干燥品计算，药材中大叶茜草素(c17h15o4)含量不得少于0.40％，羟基茜草素(c14h8o5)含量不得少于0.10％，饮片中含大叶茜草素不得少于0.20％，羟基茜草素不得少于0.080％。但实际上，茜草、大叶茜草和大茜草中均含有上述成分，无法仅通过测定药物中的大叶茜草素和羟基茜草素鉴别茜草、大叶茜草和大茜草。因此，如何准确的鉴别茜草中是否含有大叶茜草和大茜草成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。

3、除了形状鉴别，现有的可用于植物性药材鉴别的方法包括两种，即指纹图谱鉴别和标志物鉴别。指纹图谱鉴别是建立在中药材化学成分系统研究的基础上，可用于评价中药材质量的真实性、优良性和稳定性。而标志物鉴别是需要筛选出该类或该种药材与其他药材的一种或几种区别成分，将一种或几种区别成分的存在或者浓度范围作为鉴别的基础，例如，发明专利cn117250284a公开了一种快速鉴别多种硫熏中药材的标志物，发现2-磺基色氨酸可作为硫熏标志物用于鉴别硫熏中药材，所述的中药材为麦冬、贝母、鱼腥草、知母或百合。发明专利cn116973470a公开了利用脂肪酸标志物鉴别中药海藻的方法，其通过测定c20:1n-9/c16:1n-7的比值来鉴别中药海藻的真伪，为中药海藻真伪鉴别方法的制定提供了参考。但是，目前并没有任何文献公开可用于鉴别茜草、大叶茜草和大茜草的标志物。

4、发明人在研究过程中意外的发现，大叶茜草和大茜草含有大量的化合物ra-xi，而茜草中含有化合物ra-xi含量极低，发明人使用uplc-ms/ms方法，通过测定茜草与大茜草、大叶茜草中的ra-xi含量，便可鉴别茜草中是否掺有大茜草、大叶茜草，并建立了相关的鉴别方法，且该方法专属性好，基质效应影响不大，精密度、稳定性和重复性良好，以掺伪3％大茜草中ra-xi的浓度10ng/ml为判定标准，即样品的峰面积高于10ng/ml的对照品ra-xi峰面积视为检出，可以作为鉴别茜草、大叶茜草和大茜草的鉴别方法，具有广阔的应用前景。

技术实现思路

1、本发明的首要目的是提供化合物ra-xi在如下a1)-a7)任一种中的应用；

2、a1)在鉴别或辅助鉴别茜草、大茜草及大叶茜草中的应用；

3、a2)在制备鉴别或辅助鉴别茜草、大茜草及大叶茜草的产品中的应用；

4、a3)在鉴别或辅助鉴别大茜草和大叶茜草中的应用；

5、a4)在制备鉴别或辅助鉴别大茜草和大叶茜草的产品中的应用；

6、a5)在鉴别或辅助鉴别待测样本中是否含有大茜草及大叶茜草中的应用；

7、a6)在制备鉴别或辅助鉴别待测样本中是否含有大茜草及大叶茜草的产品中的应用；

8、a7)在制备鉴别或辅助鉴别茜草是否掺伪大茜草及大叶茜草中的应用；

9、所述的化合物ra-xi的化学结构式如式(ⅰ)所示：

10、

11、            

12、本发明的第二目的是提供一种中药材茜草的鉴别方法，通过对待测茜草或待测产品中的标识化合物ra-xi的含量进行检测，进行茜草种类鉴别或茜草真伪鉴别，所述的化合物ra-xi的化学式如式(ⅰ)所示：

13、

14、优选的，具体包括如下步骤：

15、(1)对照品溶液的制备

16、取化合物ra-xi加甲醇制备对照品溶液；

17、(2)供试品溶液的制备

18、取供试品，使用50％乙醇溶液配置供试品溶液；

19、(3)检测

20、分别取步骤(1)制备的对照品溶液和步骤(2)制备得到的供试品溶液，注入色谱仪和质谱仪中进行检测，其中，色谱的条件包括：

21、色谱柱：c18柱；

22、流动相：甲醇-0.1％甲酸溶液、乙腈-0.1％甲酸溶液、乙腈-水或甲醇-水中的任一种；

23、流速：0.3ml/min；

24、柱温：25～55℃；

25、进样量：1～3μl；

26、梯度洗脱。

27、优选的，所述的梯度洗脱程序如下：

28、

29、

30、优选的，所述的流动相为乙腈-水。

31、优选的，采用质谱检测器，选择ra-xi质荷比m/z 815.3→297.2和m/z 815.3→525.2为监测离子对。

32、判定原则：

33、1)供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；

34、2)供试品的提取离子流色谱中，同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 815.3→525.2的色谱峰面积值不大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；

35、3)供试品的提取离子流色谱中，同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 815.3→525.2的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为检出。

36、本发明的有益效果是：本发明提供了化合物ra-xi在鉴别或辅助鉴别茜草、大茜草及大叶茜草中的应用，并具体提供了鉴别方法，发明人使用uplc-ms/ms方法，通过测定茜草与大茜草、大叶茜草中的ra-xi含量，结果发现不同种茜草中均含有ra-xi，但大茜草、大叶茜草中该化合物含量均高于茜草含量，大茜草中ra-xi含量高于茜草中ra-xi的含量四百多倍，大叶茜草中ra-xi含量高于茜草中ra-xi的含量两千多倍。其中以ra-xi特征离子平均峰面积计约为茜草中ra-xi特征离子平均峰面积的400～2000倍，专属性好；使用上述方法鉴别茜草、大茜草及大叶茜草，基质效应影响不大，精密度、稳定性和重复性良好，检出限为1％，可以作为鉴别茜草、大叶茜草和大茜草的鉴别方法，具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.化合物ra-xi在如下a1)-a7)任一种中的应用；

2.一种中药材茜草的鉴别方法，其特征在于，通过对待测茜草或待测产品中的化合物ra-xi的含量检测，进行茜草种类鉴别或茜草真伪鉴别，所述的化合物ra-xi的化学式如式(ⅰ)所示：

3.如权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

4.如权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，所述的梯度洗脱程序如下：

5.如权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，所述的流动相为乙腈-水。

6.如权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于，采用质谱检测器，选择ra-xi质荷比m/z815.3→297.2和m/z 815.3→525.2为监测离子对。

技术总结
本发明属于物种鉴别及中药材真伪鉴别技术领域，具体涉及化合物RA‑XI在鉴别或辅助鉴别茜草类别或真伪中的应用，并具体提供了鉴别方法，通过测定茜草与大茜草、大叶茜草中的RA‑XI含量，可鉴别茜草中是否掺有大茜草、大叶茜草，并建立了相关的鉴别方法，且该方法专属性好，使用上述方法鉴别茜草、大茜草及大叶茜草，基质效应影响不大，精密度、稳定性和重复性良好，检出限为1％，可以作为鉴别茜草、大叶茜草和大茜草的鉴别方法，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：张明童,李欣,王娟弟,郭晓霞,江凯航,张生杰,马潇,李冬华,刘蕊,李敏,靳婉君,蔺瑞丽
受保护的技术使用者：甘肃省药品检验研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5