一种同时检测PEDV与PoRVA胶体金免疫层析试纸条及制备方法
本发明属于pedv与porva制备，具体涉及同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条及制备方法。
背景技术：
1、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virμs，pedv)和猪a群轮状病毒(porcine groμp a rotavirμs，porva)是造成猪只腹泻的两种主要病原，其感染可引起猪只出现以呕吐、腹泻和脱水为主要症状的高度接触性肠道传染病，具有发病率和死亡率俱高的特点。
2、目前对这两种病原的主要诊断方法为血清学和分子生物学检测。血清学检测主要包括免疫层析法和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immμnosorbent assay，elisa)。分子生物学检测通常包括病毒分离、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，pcr)、实时荧光定量pcr(qμantitative real-time pcr，rt-qpcr)和环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，lamp)等方法。这些方法在预防和控制pedv与porva方面发挥着非常重要的作用。虽然这些方法检测结果较为准确，但对设备和专业人员的依赖大，在基层养殖场的运用中需要一定时效性，而免疫层析技术可实现现场快速检测，这使其对临床样品检测的独特优势愈发明显。
3、近年来已出现单独检测pedv或porva的免疫层析技术，但由于pedv与porva感染猪只的发病症状相似，且在全国很多地区，pedv与porva常常发生混合感染，仅凭临床经验难以有效确定病原，很难制定有针对性的防治措施。而目前基于免疫层析原理的试纸条无法同时检测pedv和porva，联合检测多种病原的试纸条常常出现相互感染造成假阳性的问题，仍未解决。
技术实现思路
1、为实现以上目的，本发明采用以下技术方案：
2、一种同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，包括：样品垫；结合垫；硝酸纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上设置有第一检测线、第二检测线和质控线；所述第一检测线上包被有第一特异性抗体；所述第二检测线上包被有第二特异性抗体；吸水材料；所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水材料依次排列连接，其中所述样品垫与所述结合垫连接的一端位于所述结合垫的一端的正上方；所述结合垫与所述硝酸纤维素膜连接的一端位于所述硝酸纤维素膜一端的正上方；所述硝酸纤维素膜与所述吸水材料连接的一端位于所述吸水材料的正下方；所述质控线靠近所述吸水材料；所述第一检测线和所述第二检测线位于所述质控线和所述结合垫之间。
3、作为技术方案的进一步改进，所述结合垫还包括免疫探针；所述免疫探针设置于所述结合垫靠近所述硝酸纤维素膜的一端。
4、作为技术方案的进一步改进，所述免疫探针由aunps-mab制成。
5、作为技术方案的进一步改进，所述第一特异性抗体为pedv-mab。
6、作为技术方案的进一步改进，所述第二特异性抗体为porva-mab。
7、作为技术方案的进一步改进，所述质控线上包被有山羊抗小鼠igg多克隆抗体。
8、作为技术方案的进一步改进，本申请一种同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条还包括底板；所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水材料均设置与所述底板的板面上。
9、本申请还提供一种同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：
10、步骤一：将免疫探针喷涂在结合垫上；
11、步骤二：将第一特异性抗体、第二特异性抗体和山羊抗小鼠igg多克隆抗体喷涂在硝酸纤维素膜上，形成第一检测线、第二检测线和质控线；
12、步骤三：封闭硝酸纤维素膜其余蛋白结合位点，随后干燥、备用；
13、步骤四：在底板的顶面上依次粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水材料，使所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水材料依次排列连接，其中所述样品垫与所述结合垫连接的一端位于所述结合垫的一端的正上方；所述结合垫与所述硝酸纤维素膜连接的一端位于所述硝酸纤维素膜一端的正上方；所述硝酸纤维素膜与所述吸水材料连接的一端位于所述吸水材料的正下方，得到试纸条。
14、作为技术方案的进一步改进，在步骤四中，所述质控线靠近所述吸水材料，所述第一检测线和所述第二检测线位于所述质控线和所述结合垫之间。
15、作为技术方案的进一步改进，所述免疫探针位于所述结合垫靠近所述硝酸纤维素膜的一端。
16、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
17、1.本申请的试纸条特异性强，灵敏度高，可同时检测pedv与porva病毒，避免检测过程中因pedv与porva的混合感染出现pedv或porva假阳性的现象。
18、2.本申请的试纸条无需采用特殊容器或仪器，方便携带，随时随地检测，操作简单，检测耗时短，检测成本低。
技术特征：
1.一种同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫(2)还包括免疫探针(21)；所述免疫探针(21)设置于所述结合垫(2)靠近所述硝酸纤维素膜(3)的一端。
3.根据权利要求2所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述免疫探针(21)由aunps-mab制成。
4.根据权利要求1所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述第一特异性抗体为pedv-mab。
5.根据权利要求1所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述第二特异性抗体为porva-mab2。
6.根据权利要求1所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控线(33)上包被有山羊抗小鼠igg多克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，还包括底板(5)；所述样品垫(1)、所述结合垫(2)、所述硝酸纤维素膜(3)和所述吸水材料(4)均设置与所述底板(5)的板面上。
8.一种同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，在步骤四中，所述质控线(33)靠近所述吸水材料(4)，所述第一检测线(31)和所述第二检测线(32)位于所述质控线(33)和所述结合垫(2)之间。
10.根据权利要求8所述的同时检测pedv与porva胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述免疫探针(21)位于所述结合垫(2)靠近所述硝酸纤维素膜(3)的一端。
技术总结
本发明公开了一种同时检测PEDV与PoRVA胶体金免疫层析试纸条及制备方法，属于PEDV与PoRVA检测技术领域。本申请包括样品垫；结合垫；硝酸纤维素膜；硝酸纤维素膜上设置有第一检测线、第二检测线和质控线；第一检测线上包被有第一特异性抗体；第二检测线上包被有第二特异性抗体；吸水材料；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水材料依次排列连接，其中样品垫与结合垫连接的一端位于结合垫的一端的正上方；结合垫与硝酸纤维素膜连接的一端位于硝酸纤维素膜一端的正上方；硝酸纤维素膜与吸水材料连接的一端位于吸水材料的正下方。本申请可同时检测PEDV与PoRVA病毒，避免检测过程中因PEDV与PoRVA的混合感染出现PEDV或PoRVA假阳性的现象。
技术研发人员：陈海兰,陈滢锴,王金子,陈秋英,贺兆源,尤晖,王秋华
受保护的技术使用者：广西大学
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5