一种特异性检测螺蛳肉汤料包中圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的方法及应用与流程
本发明涉及食品检测的，具体地，涉及一种特异性检测螺蛳肉汤料包中圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的方法及应用。
背景技术：
1、柳州螺蛳粉是地方性特色美食，其独特的“鲜”味来源于螺蛳肉汤料包。《食品安全地方标准柳州螺蛳粉》(dbs 45/034-2021)中规定，螺蛳肉汤料包是以鲜(冻)螺蛳或螺蛳肉、鲜(冻)畜骨或禽骨、食用盐、食用油脂(或不添加)、调味料、香料等为原料，经原料预处理、加水熬制、过滤、冷却(或不冷却)、包装、杀菌(或不杀菌)等工艺加工制成的。其中，螺蛳主要包括环棱螺属(bellamya)和圆田螺属(cipangopaludina)等淡水经济螺类。
2、目前，存在有商家使用香精以次充好，造成螺肉掺假、甚至不含螺肉的现象。为了更好维护消费者的权益，需要对螺蛳粉汤包中螺肉的检测分析方法进行研究。由于螺蛳肉汤包内含物成分复杂，多油脂、盐类和色素，且经高温熬制，残留螺肉量少，提取困难，检测难度加大。因此，寻找一种简单、快捷、灵敏的检测预包装螺蛳肉汤料包中螺蛳的方法至关重要。
技术实现思路
1、为克服现有技术中存在的上述缺陷与不足，本发明提供一种特异性检测螺蛳肉汤料包中圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的方法及应用。
2、本发明的第一个目的是提供一种用于检测螺肉成分的引物探针组。
3、本发明的第二个目的是提供一种用于检测螺肉成分的组合物。
4、本发明的第三个目的是提供任一上述的引物探针组和/或组合物在制备螺肉成分的检测产品中的应用。
5、本发明的第四个目的是提供一种用于检测螺肉成分的试剂盒。
6、因此，本发明要求保护以下内容：
7、一种用于检测螺肉成分的引物探针组，所述螺肉为圆田螺属螺肉，所述引物探针组由正向引物f1、反向引物r1、荧光探针p1组成，所述正向引物f1的核苷酸序列如seq idno：1所示，所述反向引物r1的核苷酸序列如seq id no：2所示，所述荧光探针p1的核苷酸序列如seq id no：3所示；
8、所述螺肉为环棱螺属螺肉，所述引物探针组由正向引物f2、反向引物r2、荧光探针p2组成，所述正向引物f2的核苷酸序列如seq id no：4所示，所述反向引物r2的核苷酸序列如seq id no：5所示，所述荧光探针p2的核苷酸序列如seq id no：6所示。
9、作为一种可实施的方式，所述荧光探针p1的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团tamra。
10、作为一种可实施的方式，所述荧光探针p2的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团mgb。
11、一种用于检测螺肉成分的组合物，所述组合物包含任一上述的引物探针组和内参基因引物探针组。
12、优选地，所述内参基因引物探针组由正向引物f、反向引物r、荧光探针p组成，所述正向引物f的核苷酸序列如seq id no：7所示，所述反向引物r的核苷酸序列如seq id no：8所示，所述荧光探针p的核苷酸序列如seq id no：9所示。
13、作为一种可实施的方式，所述荧光探针p的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团mgb。
14、任一上述的引物探针组和/或组合物在制备螺肉成分的检测产品中的应用。
15、一种用于检测螺肉成分的试剂盒，所述试剂盒含有任一上述的引物探针组和内参基因引物探针组。
16、优选地，所述内参基因引物探针组由正向引物f、反向引物r、荧光探针p组成；
17、所述正向引物f的核苷酸序列如seq id no：7所示，所述反向引物r的核苷酸序列如seq id no：8所示，所述荧光探针p的核苷酸序列如seq id no：9所示。
18、优选地，所述试剂盒还包含pcr反应预混液、阳性对照参考品、阴性对照参考品和/或ddh2o。
19、更优选地，所述阳性对照参考品为圆田螺属和环棱螺属的dna；所述阴性对照参考品为无rna酶的去离子水。
20、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
21、本发明公开了一种特异性检测螺蛳肉汤料包中圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的方法及应用。本发明分别基于圆田螺属线粒体trnf基因和环棱螺属线粒体trnv基因为靶标，设计出能够特异性检测圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的引物探针组。使用本发明的引物探针组可以特异性检测出螺蛳肉汤料包中的螺肉成分，其对圆田螺属螺肉成分的检测灵敏度达到0.2pg/μl，对环棱螺属螺肉成分的检测灵敏度达到0.1pg/μl。本发明的检测方法具有较强的特异性和重复性，可为螺蛳粉的质量控制提供有效的技术手段。
技术特征：
1.一种用于检测螺肉成分的引物探针组，其特征在于，所述螺肉为圆田螺属螺肉，所述引物探针组由正向引物f1、反向引物r1、荧光探针p1组成，所述正向引物f1的核苷酸序列如seq id no：1所示，所述反向引物r1的核苷酸序列如seq id no：2所示，所述荧光探针p1的核苷酸序列如seq id no：3所示；
2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光探针p1的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团tamra。
3.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光探针p2的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团mgb。
4.一种用于检测螺肉成分的组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求1～3任一所述的引物探针组和内参基因引物探针组。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述内参基因引物探针组由正向引物f、反向引物r、荧光探针p组成，所述正向引物f的核苷酸序列如seq id no：7所示，所述反向引物r的核苷酸序列如seq id no：8所示，所述荧光探针p的核苷酸序列如seq id no：9所示。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述荧光探针p的5'端标记荧光基团fam，3'端标记淬灭基团mgb。
7.权利要求1～3任一所述的引物探针组和/或权利要求4～6任一所述的组合物在制备螺肉成分的检测产品中的应用。
8.一种用于检测螺肉成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1～3任一所述的引物探针组和内参基因引物探针组。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述内参基因引物探针组由正向引物f、反向引物r、荧光探针p组成；
10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含pcr反应预混液、阳性对照参考品、阴性对照参考品和/或ddh2o。
技术总结
本发明公开了一种特异性检测螺蛳肉汤料包中圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的方法及应用。本发明分别基于圆田螺属线粒体trnF基因和环棱螺属线粒体trnV基因为靶标，设计出能够特异性检测圆田螺属和环棱螺属螺肉成分的引物探针组。使用本发明的引物探针组可以特异性检测出螺蛳肉汤料包中的螺肉成分，其对圆田螺属螺肉成分的检测灵敏度达到0.2pg/μL，对环棱螺属螺肉成分的检测灵敏度达到0.1pg/μL。本发明的检测方法具有较强的特异性和重复性，可为螺蛳粉的质量控制提供有效的技术手段。
技术研发人员：黄晓韵,巫坚,韦涛,李鑫,黄惠琳,常彦磊,张璜,陈灏挺
受保护的技术使用者：广西—东盟食品检验检测中心
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5