抗Mucin6蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗mucin6蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、黏蛋白6(mucin6，muc6)是分泌型黏蛋白的一种，其编码基因定位于11号染色体短臂1区5带，编码含有2439个氨基酸残基的蛋白，其中包括富含半胱氨酸的n端结构域，含有丰富的丝氨酸，苏氨酸，脯氨酸的高糖基化结构域以及c端胱氨酸结，这对muc6形成寡聚物具有重要的作用。生理情况下，黏蛋白muc6主要在正常的胃黏膜组织中表达，起到润滑和保护胃黏膜的作用。但随着研究的深入，发现muc6在多种肿瘤中异常表达，并在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要的作用。muc6除黏蛋白均存在的蛋白骨架即黏液核心肽以及大量连接于核心肽上的糖链外，其结构上通常还附着含α1,4n-乙酰葡糖胺末端残基(α1,4-linkedn-acetylglucosamineresidues，αglcnac)的o-聚糖，这种特殊的结构在muc6行使功能的过程中发挥了重要的作用，随着muc6在肿瘤病理进程中重要性的凸显，其在肿瘤生物学行为中的作用也得到了进一步的阐示。这些都为深入了解muc6的作用及作用机制奠定了基础，同时为肿瘤的预防、早期诊断和治疗监测提供了研究基础和理论依据。

2、有研究表明，在胃肠道肿瘤中，muc6的表达情况因肿瘤类型和分期而异。在胃癌的发生、发展过程中，muc6蛋白的表达量逐渐丢失，muc6的表达可能与肿瘤的lauren分型、分化程度、肿瘤侵犯程度和分期等相关。研究表明，muc6在混合型胃癌中的表达高于肠型和弥漫型胃癌，且在黏液腺癌中的表达高于低分化和中高分化胃癌。并且muc6丢失的程度与胃癌的不良预后紧密相关。

3、在胰腺癌肿瘤细胞中，上调muc6表达可以抑制肿瘤细胞的侵袭迁移能力。不仅如此，muc6可以诱导乳腺肿瘤组织中的tn抗原形成，tn抗原可以激活th17型免疫细胞，而促进肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤的进展。因此，muc6在抑制肿瘤发生、发展的过程中发挥着十分重要的作用。

4、在胃肠道肿瘤的病理诊断中，muc6常作为免疫组化检测的一个重要指标。通过检测muc6在肿瘤组织中的表达情况，可以辅助病理医师对肿瘤进行分型、分期和预后评估。例如，在胃癌的病理诊断中，muc6的表达情况可以与其他粘蛋白(如muc2、muc5ac)的表达情况相结合，共同判断肿瘤的病理类型和分化程度。

技术实现思路

1、发明人提供了一种抗mucin6蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seq id no.2所示的氨基酸序列。

2、进一步的，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为37d10。

3、发明人又提供了一种抗mucin6蛋白单克隆抗体的制备方法，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。

4、进一步的，所述重组蛋白包含mucin6蛋白片段及his蛋白标签。

5、进一步的，所述mucin6蛋白片段为1950-2050位点的片段，其为seq id no.3所示的氨基酸序列。

6、进一步的，重组过程中选用的质粒载体为pet30a。

7、发明人还提供一种mucin6蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂含有上述抗mucin6蛋白单克隆抗体为其有效成分。

8、进一步的，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

9、区别于现有技术，本发明所产生的有益技术效果为：上述技术方案选取mucin6蛋白位1950-2050位点氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌bl21(de3)表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含mucin6蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得小鼠杂交瘤细胞株，和抗mucin6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达mucin6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术特征：

1.一种抗mucin6蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seqid no.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为37d10。

3.一种抗mucin6蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含mucin6蛋白片段及his蛋白标签。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述mucin6蛋白片段为1950-2050位点的片段，其为seq id no.3所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，重组过程中选用的质粒载体为pet30a。

7.一种mucin6蛋白免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测试剂含有权利要求1所述抗mucin6蛋白单克隆抗体为其有效成分。

8.根据权利要求7所述的免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

技术总结
本发明涉及一种可以识别人Mucin6抗原的单克隆抗体、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取Mucin6蛋白的1950‑2050位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含Mucin6蛋白片段及组氨酸标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得小鼠杂交瘤细胞株37D10以及由该细胞株所分泌的抗Mucin6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达Mucin6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术研发人员：陈泳,杨清海,陈惠玲,陈倩,吴楠楠
受保护的技术使用者：福州迈新生物技术开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5