腺相关病毒包装载体及其使用方法与流程

本文公开了包含人工内含子和修饰的复制编码序列的核酸分子。本文还公开了包含核酸分子的载体和细胞，该核酸分子继而包含人工内含子和修饰的复制编码序列。序列表本申请包含与其一起作为xml文件提交的序列表(名称：“jbi6718-序列表-st26.xml”，大小：37,181字节；创建：2023年3月24日)。该序列表全文以引用方式并入。

背景技术：

1、腺相关病毒(aav)可用于产生含有用于递送至靶细胞的所关注dna序列的重组aav颗粒。这些aav颗粒缺乏病毒基因，因此在单独的包装质粒中提供病毒结构和包装基因。通常，包装质粒含有复制(rep)基因和衣壳(cap)病毒基因。

技术实现思路

1、已经构建了用于包装重组腺相关病毒血清型5(aav5)病毒的质粒。该质粒含有来自aav2的aav复制基因和来自aav5的衣壳基因。为了防止rep和cap基因异常包装到raav衣壳中，人工内含子已被插入到rep基因中。这种2kb内含子使得质粒的rep和cap编码区太大而不能包装。

2、本文描述了包含seq id no:1中所示的核酸序列的核酸分子。本文还描述了包含seq id no:6中所示的核酸序列的核酸分子。

3、还描述了包含核酸分子的载体，该核酸分子包含seq id no:1或seq id no:6中所示的核酸序列。在某些实施方案中，该载体包含以下中的至少一者：包含seq id no:6中所示的核酸序列的核酸分子、包含seq id no:7中所示的核酸序列的核酸分子、以及包含seqid no:8中所示的核酸序列的核酸分子。

4、在另外的实施方案中，载体包含卡那霉素抗性基因。

5、本文还描述了包含seq id no:5中所示的核酸序列的载体。

6、本文还描述了被转化以表达核酸分子的细胞，该核酸分子包含seq id no:1或seqid no:6中所示的核酸序列。在某些实施方案中，细胞被转化以表达包含核酸分子的载体，该核酸分子包含seq id no:1或seq id no:6中所示的核酸序列。在某些实施方案中，细胞被转化以表达载体，该载体包含以下中的至少一者：包含seq id no:6中所示的核酸序列的核酸分子、包含seq id no:7中所示的核酸序列的核酸分子、以及包含seq id no:8中所示的核酸序列的核酸分子。

7、本文还描述了被转化以表达包含核酸分子的载体的细胞，该核酸分子包含seq idno:5中所示的核酸序列。在某些实施方案中，该细胞为病毒生产细胞。

8、本文还描述了产生腺相关病毒包装载体的方法，该方法包括将根据权利要求1所述的核酸分子引入复制编码序列中以产生内含子修饰的复制基因；以及将内含子修饰的复制基因引入载体骨架中。

技术特征：

1.一种核酸分子，所述核酸分子包含与seq id no:1至少95％相同的核酸序列。

2.一种核酸分子，所述核酸分子包含与seq id no:6至少95％相同的核酸序列。

3.一种载体，所述载体包含根据权利要求1或权利要求2所述的核酸分子。

4.根据权利要求3所述的载体，其中所述载体包含：根据权利要求2所述的核酸分子、包含与seq id no:7至少95％相同的核酸序列的核酸分子、以及包含与seq id no:8至少95％相同的核酸序列的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的载体，其中所述载体包含卡那霉素抗性基因。

6.根据权利要求3所述的载体，其中所述载体包含核酸分子，所述核酸分子包含与seqid no:5至少95％相同的核酸序列。

7.一种载体，所述载体包含与seq id no:5至少95％相同的核酸序列。

8.一种细胞，所述细胞被转化以表达根据权利要求1或2所述的核酸分子或根据权利要求4至7中任一项所述的载体。

9.根据权利要求8所述的细胞，其中所述细胞为病毒生产细胞。

10.一种产生腺相关病毒包装载体的方法，所述方法包括：

11.一种核酸分子，所述核酸分子包含与seq id no:10至少95％相同的核酸序列。

技术总结
本文提供了包含人工内含子和修饰的复制编码序列的核酸分子。还提供了包含核酸分子的载体和细胞，该核酸分子包含人工内含子和修饰的复制编码序列。

技术研发人员：W·佩里
受保护的技术使用者：杨森研发有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/5