一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途

1.本发明属于医药技术领域，具体地涉及一类从樟科厚壳桂属植物cyptocarya wrayi中分离得到的具有醌还原酶诱导作用的异喹啉生物碱及该类化合物的制备和应用。


背景技术：

2.苯醌还原酶是普遍存在于人体各种组织的黄素蛋白酶，能将醌类还原为氢醌，从而预防由醌类介导的氧化性损伤，苯醌还原酶的诱导活化反映了细胞响应内源性或外源性伤害时抑制氧化应激的能力。作为还原性酶，苯醌还原酶与化学预防及抗癌活性有关，具有解毒醌类毒性物质和活化生物还原性抗肿瘤药物的双重功能，因此可分别发挥肿瘤预防和治疗的作用。因此，常把诱导活化苯醌还原酶作为保护细胞的一种策略。
3.而厚壳桂属植物富含结构多样、活性广泛的生物碱类次生代谢产物，涉及苄基异喹啉、菲并吲哚里希丁、原阿朴菲和pavines等类型，本发明从cyptocarya wrayi中提取分离、制备的具有醌还原酶诱导作用的异喹啉生物碱在抗肿瘤药物的研究具有重要的意义和前景，为此提出一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途，以解决上述背景技术中提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途，所述具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱包括化合物1和化合物2，所述化合物1和化合物2的化学结构式分别如下：
[0006][0007]
其制备步骤如下：
[0008]
步骤一：将干燥的cryptocarya wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；
[0009]
步骤二：将步骤一中得到的粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液用乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；
[0010]
步骤三：将乙酸乙酯提取浸膏进行mci柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，根据tlc显色合并相似流份得到7个组分，其分别为fr.1-fr.7，将其中的fr.5组分在sephadexlh-20(etoh)凝胶柱上分离得到4个亚组分，其分别为fr.7a-fr.7d，将其中的fr.7c亚组分经硅胶柱层析分离得到四个亚组分，其分别为fr.7c
1-fr.7c4；
[0011]
步骤四：将fr.7c2亚组分进一步经半制备hplc纯化得到如权利要求1所述的化合物1和化合物2。
[0012]
本技术方案中优选的，所述步骤一中减压浓缩的温度≤45℃。
[0013]
本技术方案中优选的，所述步骤一中采用的乙醇纯度为95％。
[0014]
本技术方案中优选的，所述步骤三中洗脱剂采用石油醚/丙酮，其中石油醚和丙酮的体积比为8∶1-2∶1。
[0015]
本技术方案中优选的，所述步骤四中采用半制备型hplc以乙腈和水体积比为40∶60，流速3.0ml/min在保留时间40.2min得到化合物1，在保留时间41.0min得到化合物2。
[0016]
其应用方法如下，将化合物1和化合物2中的任意一种或者两种的混合物应用在肝癌细胞中的苯醌还原酶诱导活性中。
[0017]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0018]
本发明中所提出的化合物1和化合物2，均属于新的化合物，其未被公开，同时，通过对化合物1和化合物2进行苯醌还原酶诱导活性试验，结果表明化合物1和化合物2对hepa 1c1c7小鼠肝癌细胞具有中等强度的苯醌还原酶诱导活性，实验结果表明本发明中所提出的化合物1和化合物2，可用来制备苯醌还原酶诱导剂，用于制备抗肿瘤药物，其在抗肿瘤药物的研究中具有重要的意义和前景。
附图说明
[0019]
图1为本发明所提出的化合物1的1h-nmr谱(氘代试剂：cd3od)；
[0020]
图2为本发明所提出的化合物1的
13
c-nmr谱(氘代试剂：cd3od)；
[0021]
图3为本发明所提出的化合物1的hsqc谱(氘代试剂：cd3od)；
[0022]
图4为本发明所提出的化合物1的hmbc谱(氘代试剂：cd3od)；
[0023]
图5为本发明所提出的化合物1的1h-1
h cosy谱(氘代试剂：cd3od)；
[0024]
图6为本发明所提出的化合物1的roesy谱(氘代试剂：cd3od)；
[0025]
图7为本发明所提出的化合物1的(+)-hresims谱；
[0026]
图8为本发明所提出的化合物1的ir光谱；
[0027]
图9为本发明所提出的化合物2的1h-nmr谱(氘代试剂：cdcl3)；
[0028]
图10为本发明所提出的化合物2的
13
c-nmr谱(氘代试剂：cdcl3)；
[0029]
图11为本发明所提出的化合物2的hsqc谱(氘代试剂：cdcl3)；
[0030]
图12为本发明所提出的化合物2的hmbc谱(氘代试剂：cdcl3)；
[0031]
图13为本发明所提出的化合物2的roesy谱(氘代试剂：cdcl3)；
[0032]
图14为本发明所提出的化合物2的(+)-hresims谱。
具体实施方式
[0033]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0034]
需要说明的是，在本发明的描述中，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖
直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件所必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
[0035]
此外，应当理解，为了便于描述，附图中所示出的各个部件的尺寸并不按照实际的比例关系绘制，例如某些层的厚度或宽度可以相对于其他层有所夸大。
[0036]
应注意的是，相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义或说明，则在随后的附图的说明中将不需要再对其进行进一步的具体讨论和描述。
[0037]
本发明提供一种技术方案：一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途，该具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱，包括化合物1和化合物2，所述化合物1和化合物2的化学结构式分别如下：
[0038]
该化学结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位。
[0039]
其制备步骤如下：
[0040]
步骤一：将6.0kg干燥的cryptocarya wrayi小枝粉碎后用30l的浓度为95％乙醇按浸渍法提取，每次浸渍7天，共提取3次，合并后得提取液，将提取液在温度为40℃的条件下减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏285.0g；
[0041]
步骤二：将步骤一中得到的粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液采用1.5l的乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯相减压浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏38.5g；
[0042]
步骤三：将乙酸乙酯提取浸膏进行mci柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，根据tlc显色合并相似流份得到7个组分，其分别为fr.1-fr.7，将其中4.6g的fr.5组分在sephadexlh-20(etoh)凝胶柱上分离得到4个亚组分，其分别为fr.7a-fr.7d，将其中476.8mg的fr.7c亚组分经硅胶柱层析分离得到四个亚组分，其分别为fr.7c
1-fr.7c4，其中洗脱剂采用石油醚/丙酮，其中石油醚和丙酮的体积比为4∶1；
[0043]
步骤四：将步骤三中得到的104.8mg的fr.7c2亚组分进一步经半制备hplc纯化以乙腈和水体积比为40：60，流速3.0ml/min，在保留时间为40.2min时得到2.0mg的化合物1和在保留时间为41.0min时得到1.2mg的化合物2。
[0044]
按常规经nmr、hresims、计算ecd和uv等多种现代光谱技术，确定了化合物1和化合物2的化学结构，其理化性质如下：
[0045]
化合物1：黄色无定形粉末；(c 0.05，ch3oh)；uvλ
max
(logε)231(4.03)，278(3.78)，305(3.70)nm；ecd(c 2.0
×
10-5
gml-1
，meoh)λ(δε)223(+22.08)，243(-3.20)，269(+5.95)，303(+3.74)nm；ir ν
max 1716，1641，1607，1515，1471cm-1
；1h-nmr和
13
c-nmr数据，见表1；(+)hr-esi-ms m/z 372.1440[m+h]
+
(calcd for c
20h22
no6，372.1447).
[0046]
化合物2：黄色无定形粉末；(c 0.02，ch3oh)；uvλ
ma
x(logε)208(4.40)，
224(4.43)，274(3.98)，303(3.89)nm；ecd(c 1.7
×
10-4
gml-1
，meoh)λ(δε)220(-28.86)，237(+32.36)，260(+9.52)，284(-6.79)，301(4.21)，321(-7.62)nm；1h-nmr和
13
c-nmr数据，见表1；(+)hr-esi-ms m/z 370.1288[m]
+
(calcd for c
20h20
no6，370.1285).
[0047]
其中化合物1和化合物2具体的氢谱和碳谱数据如表1所示。
[0048]
表1
[0049][0050]
应用实验：将hepa 1c1c7小鼠肝癌细胞(atcc crl-2026)在添加了10％胎牛血清的鹰的最低基础培养基中，在37℃的95％空气和5％co2增湿空气中培养，将细胞接种在96孔板中，并用指定剂量的化合物处理24h。除去培养基，细胞用30μl细胞裂解液[0.8％洋地黄苷和2mm edta溶液(ph 7.8)]在37℃下裂解15分钟。然后，将170μl含有牛血清白蛋白、3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化铵(mtt)、1.5％吐温20、0.5m三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、7.5mm黄素腺嘌呤二核苷酸、150mm葡萄糖-6-磷酸盐、10单位/μl葡萄糖-6-磷
酸脱氢酶、50mm烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和50mm甲萘醌的完整反应混合物添加到每个孔中。培养约4min后形成蓝色，并在酶标仪读取器上记录630nm处的吸光度。
[0051]
实验结果：与阳性对照相比萝卜硫素在2.0μm显示1.7倍诱导活性，化合物1和化合物2均显示中等强度qr诱导活性，在3.125μm浓度下分别显示1.2倍和1.1倍诱导活性。
[0052]
通过上述应用试验可知化合物1和化合物2对hepa 1c1c7小鼠肝癌细胞具有中等强度的苯醌还原酶诱导活性，其可用来制备苯醌还原酶诱导剂，用于制备抗肿瘤药物，其在抗肿瘤药物的研究中具有重要的意义和前景。
[0053]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

技术特征：
1.一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱，其特征在于，包括化合物1和化合物2，所述化合物1和化合物2的化学结构式分别如下：2.一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备方法，其特征在于，其制备步骤如下：步骤一：将干燥的厚壳桂属植物cryptocarya wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；步骤二：将步骤一中得到的粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液用乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；步骤三：将乙酸乙酯提取浸膏进行mci柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，根据tlc显色合并相似流份得到7个组分，其分别为fr.1-fr.7，将其中的fr.5组分在sephadexlh-20(etoh)凝胶柱上分离得到4个亚组分，其分别为fr.7a-fr.7d，将其中的fr.7c亚组分经硅胶柱层析分离得到四个亚组分，其分别为fr.7c
1-fr.7c4；步骤四：将fr.7c2亚组分进一步经半制备hplc纯化得到如权利要求1所述的化合物1和化合物2。3.根据权利要求2所述的一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备方法，其特征在于，所述步骤一中减压浓缩的温度≤45℃。4.根据权利要求2所述的一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备方法，其特征在于，所述步骤一中采用的乙醇纯度为95％。5.根据权利要求2所述的一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备方法，其特征在于，所述步骤三中洗脱剂采用石油醚/丙酮，其中石油醚和丙酮的体积比为8∶1-2∶1。6.根据权利要求2所述的一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备方法，其特征在于，所述步骤四中采用半制备型hplc以乙腈和水体积比为40∶60，流速3.0ml/min在保留时间40.2min得到化合物1，在保留时间41.0min得到化合物2。7.应用权利要求1中一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的方法，其特征在于，将化合物1和化合物2中的任意一种或者两种的混合物应用在肝癌细胞中的苯醌还原酶诱导活性中。

技术总结
本发明公开了一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途，涉及医药技术领域。一类具有苯醌还原酶诱导活性的异喹啉生物碱的制备及其用途，包括化合物1和化合物2，其制备步骤如下，步骤一：将干燥的Cryptocarya wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏。本发明中所提出的化合物1和化合物2，均属于新的化合物，其未被公开，同时，通过对化合物1和化合物2进行苯醌还原酶诱导活性试验，结果表明化合物1和化合物2对Hepa 1c1c7小鼠肝癌细胞具有中等强度的苯醌还原酶诱导活性，实验结果表明本发明中所提出的化合物1和化合物2，可用来制备苯醌还原酶诱导剂，用于制备抗肿瘤药物。瘤药物。瘤药物。


技术研发人员：周志望 王勇 刘运来 王肖娜 江甜甜 唐圆圆
受保护的技术使用者：南昌大学
技术研发日：2021.11.22
技术公布日：2022/3/7