一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法与流程
1.本发明涉及医药分析方法领域，具体涉及一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法。
背景技术：
：：2.阿法骨化醇化学名为(5z,7e)-9,10-开环胆甾-5,7,10(19)-三烯-1α,3β-二醇，结构式如下：阿法骨化醇可增加小肠和肾小管对钙的重吸收，抑制甲状旁腺增生，减少甲状旁腺激素合成与释放，抑制骨吸收，增加转化生长因子-b（tgf-b）和胰岛素样生长因子-i（1gf-i）合成，促进胶原和骨基质蛋白合成，调节肌肉钙代谢，促进肌细胞分化，增强肌力，增加神经肌肉协调性，减少跌倒倾向。3.阿法骨化醇片用于治疗改善慢性肾功能不全、甲状旁腺功能低下和抗维生素d佝偻病、骨软化症患者因维生素d代谢异常的症状，如：低钙血症、抽搐、骨痛及骨损害和骨质疏松症。4.目前，国际上仅有《中国药典》收载了阿法骨化醇片的质量标准，但没有对溶出度的检测进行规定。而在《中国药典》中同品种软胶囊（即阿法骨化醇软胶囊）的质量标准中同样没有对溶出度的检测进行规定。对于他骨化醇类药物，《中国药典》和usp中维生素d2（麦角骨化醇）及维生素d3（胆骨化醇）的口服固体制剂标准也均未制定溶出度检查项。而针对阿法骨化醇片的溶出度检测方法及相关研究也鲜有报道。5.对于口服固体制剂，作为评价药物质量的重要手段，溶出度的研究具有重要意义。由于阿法骨化醇片的规格仅为0.25μg和0.5μg，其溶出度检测在灵敏度方面存在很大挑战，此外，由于阿法骨化醇脂溶性强，在溶出过程及取样过程中极易产生吸附损失，也对阿法骨化醇片溶出度的准确测定带来了极大挑战。6.现有文献（quantificationofalfacalcidoltabletsdissolutioncontentbychemicalderivatizationandlc-ms，yangliu等，journalofanalyticalmethodsinchemistry，2020，1-6）公开了一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，其中的溶出液的制备采用的方法为：溶出装置为桨法，500mlph6.8磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）为溶出介质，转速为每分钟50转，取样后溶出液经过滤、脱盐提取、加入内标物质再衍生化处理后，用液相-质谱联用技术（lc-ms）进行定量分析。该方法，前处理方法复杂，使用的溶剂多且具有较高毒性，对检测技术要求较高，不具有普遍适用性；此外，方法研究采用的溶出介质单一，不能对产品溶出特性进行系统全面的研究。7.为改进现有技术的不足，需要针对阿法骨化醇片开发一种专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，操作简便、绿色、经济且普遍适用的溶出度检测的方法，此外，该方法还应参照《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》采用多种不同ph的溶出介质进行考察研究。本发明人经过大量的测试条件的筛选研究，惊奇的发现通过改变溶出液的制备及检测方法，不但可以减少操作步骤，避免使用高毒性溶剂，还能够大大提高检测灵敏度，克服了现有技术存在的缺陷，并通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面，研究结果证明，本方法对阿法骨化醇片的不同制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的开发和评价提供了可靠的分析手段。技术实现要素：8.本发明的目的在于建立一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法能够专属、灵敏、准确、精密地对阿法骨化醇片的溶出液进行定量检测，在减少操作步骤、避免使用高毒性溶剂的同时，大大提高了检测灵敏度；通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面。9.为实现本发明的目的，提供如下实施方案。10.在一实施方案中，一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质；（2）在溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程中加入甲醇以消除溶剂效应（3）采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，以甲醇和水组成为流动相。11.优选的，上述本发明的检测方法，所述小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转，所述溶出介质选自0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液中的一种或多种；所述解吸附物质为0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）。12.优选的，上述本发明的检测方法，所述溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程，进一步包括将从溶出仪中取出的溶出液过滤，置量瓶中称量，加入甲醇稀释定容；配制的供试品溶液及对照品溶液中含有50%甲醇。13.优选的，上述的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇-水（94:6）~甲醇-水（96:4）甲醇和水的混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm。14.更优选的，流动相甲醇和水的体积比为95:5，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为265nm。15.在一实施方案中，本发明的一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，包含（1）采用《中国药典》收载的小杯法制得溶出液使方法达到较好的检测灵敏度；通过在溶出介质中加入少量解吸附物质来阻止主成分在溶出仪中的吸附；（2）溶出液中加入适量甲醇以消除溶剂效应，（3）采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；以甲醇和水组成为流动相进行梯度洗脱；并采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器进行阿法骨化醇片溶出度的检测。16.在上述实施方案中，本发明的方法，采用《中国药典》收载的小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转。17.在上述实施方案中，本发明的方法，溶出介质选用0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液，并均添加0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）作为解吸附物质。18.在上述实施方案中，本发明的方法，溶出液经玻璃注射器从溶出仪中取出后，需经聚醚砜滤膜过滤，并加入适量甲醇以消除溶剂效应，使最终的溶剂中含有50%甲醇。19.在上述实施方案中，本发明的方法，为使溶出供试品溶液和对照品溶液具有相同的溶剂组成，从而避免不同溶剂系统中主成分响应因子的差异，需要使配制的对照品溶液中含有50%甲醇。20.在上述实施方案中，本发明的方法，为避免溶出溶液定量稀释过程中，多次转移时可能造成的吸附，需要对溶出液的计量采用称量的方式，在溶出液的续滤液精确称定重量后，立即加入甲醇稀释定容。21.在上述实施方案中，本发明的方法，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇和水混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm在一具体实施方案中，本发明的一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，包含：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml（优选150ml），转速为每分钟25转~50转（优选50转）；（2）溶出介质选用0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液，并均添加0.1%~0.2%（优选0.1%）十二烷基硫酸钠（sds）作为解吸附物质；（3）溶出液经玻璃注射器从溶出仪中取出后，需经聚醚砜滤膜过滤，并加入适量甲醇以消除溶剂效应，使最终的溶剂中含有50%甲醇；（4）为使溶出供试品溶液和对照品溶液具有相同的溶剂组成，从而避免不同溶剂系统中主成分响应因子的差异，需要使配制的对照品溶液中含有50%甲醇；（5）避免溶出溶液定量稀释过程中，多次转移时可能造成的吸附，需要对溶出液的计量采用称量的方式，在溶出液的续滤液精确称定重量后，立即加入甲醇稀释定容；（6）采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选agilentporoshell120ec-c184.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇和水的混合溶液，甲醇和水的体积比为94:6~96:4，优选为95:5流速：0.9ml/min~1.1ml/min，优选1.0ml/min柱温：39℃~41℃，优选40℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器（优选agilentg4212a）检测波长：263nm~267nm，优选265nm。22.本发明的检测方法的有益技术效果在于：（1）本发明的方法，采用《中国药典》收载的小杯法，使用较少体积的溶出介质，使制得的溶出液浓度较高，帮助方法达到较好的检测灵敏度，此外，通过采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器，最终克服了极低剂量阿法骨化醇片溶出度检测的灵敏度问题。方法验证结果表明，本方法的定量限为0.3ng/ml，而现有文献的定量限为0.8ng/ml，本方法具有更好的检测灵敏度。具体验证数据参见实施例1灵敏度试验。23.（2）本发明的方法，基于阿法骨化醇的脂溶性，研究明确了在溶出过程及取样过程中避免其产生吸附损失的方法，能够确保检测的准确度。具体验证数据参见实施例2准确度试验。24.（3）本发明的方法，通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面，研究结果证明，本方法对阿法骨化醇片的制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的开发和评价提供了可靠的分析手段。具体验证数据参见实施例5溶出方法的区分力验证。25.（4）本发明的方法，采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；以甲醇和水组成为流动相进行梯度洗脱；溶出液中加入适量甲醇以消除溶剂效应，并采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器进行阿法骨化醇片溶出度的检测。与现有文献相比，本发明前处理方法简单，步骤少，使用的溶剂少且毒性低，更为绿色、经济；采用常见的紫外检测技术，更具有普遍适用性。26.综上，本发明建立的阿法骨化醇片溶出度的检测方法，按国内外相关指导原则进行了方法验证，表明本方法专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，且在整体设计上使方法具有操作简便、绿色、经济及普遍适用的优点，可用于阿法骨化醇片的质量研究，并对类似品种具有借鉴价值。附图说明27.图1为0.1mol/l盐酸溶液介质中供试品溶液色谱图图2为ph4.5磷酸盐缓冲液介质中供试品溶液色谱图图3为ph6.8磷酸盐缓冲液介质中供试品溶液色谱图图4为0.1mol/l盐酸溶液介质中溶出方法区分力曲线图图5为ph4.5磷酸盐缓冲液介质中溶出方法区分力曲线图图6为ph6.8磷酸盐缓冲液介质中溶出方法区分力曲线图具体实施方式28.下面通过实施例对本发明做进一步的说明，以帮助理解本发明的实质，但不以任何方式限制本发明的范围。29.实施例1灵敏度试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。30.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。31.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。32.（4）阿法骨化醇储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置50ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约40ng/ml）。33.（5）定量限溶液：取阿法骨化醇储备液2ml，置250ml量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.3ng/ml）。34.色谱条件：本试验选用agilentporoshell120ec-c184.6mm×50mm，2.7μm色谱柱，以甲醇-水（95:5）为流动相，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样体积为1ml，检测器为agilentg4212a，检测波长为265nm。35.样品测定：精密量取定量限溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，连续进样6次，记录色谱图。考察阿法骨化醇色谱峰的信噪比（s/n）与阿法骨化醇峰面积的rsd。结果见表1。36.表1灵敏度试验考察结果结果表明，定量限溶液连续进样6次，阿法骨化醇色谱峰的s/n均大于10，峰面积的rsd为1.4%。本方法具有较高的检测灵敏度，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。37.实施例2准确度试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。38.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。39.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。40.（4）对照品储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.2μg/ml）。41.（5）0.25μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml，置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml）。42.（6）0.5μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液2ml，置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml）。43.（7）回收率储备液-1：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2.5ml，置200ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.25μg/ml）。44.（8）回收率储备液-2：精密量取回收率储备液-110ml，置25ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.1μg/ml）。45.（9）0.25μg规格40%浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质1ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-21ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.3ng/ml），平行配制3份。46.（10）0.25μg规格100%（0.5μg规格50%）浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质2.5ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-22.5ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml），平行配制3份。47.（11）0.25μg规格200%（0.5μg规格100%）浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质2ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-12ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml），平行配制3份。48.（12）0.5μg规格150%浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质3ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-13ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约2.4ng/ml），平行配制3份。49.色谱条件：同实施例1。50.样品测定：（1）溶出液体积校正：精密量取加有处方量空白辅料的37℃溶出介质10ml，精密称定，取三次精密称定的平均值，校正溶出液的体积。公式如下：vweigh（ml）=10×mdis/m10ml式中：vweigh—称取溶液校正体积（ml）10—用移液管移取加有处方量空白辅料的溶出介质的体积（ml）mdis—过滤后溶出溶液的称样量（mg）m10—10ml加有处方量空白辅料的溶出介质的三次精密称定的平均值（mg）（2）精密量取对照品溶液、各浓度水平供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。前三个浓度水平分别作为0.25μg规格的40%、100%、200%浓度水平供试品溶液，后三个浓度水平分别作为0.5μg规格50%、100%、150%浓度水平供试品溶液，考察1）各规格9份供试品溶液各自的回收率，2）9份供试品溶液回收率的rsd。结果见表2。51.表2准确度试验考察结果结果表明，0.25μg规格和0.5μg规格三个浓度水平9份供试品溶液的回收率分别在95.9%~102.5%和96.1%~100.2%范围内，9份供试品溶液回收率的rsd分别为2.3%和1.4%。本方法具有较高的准确度，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。52.实施例3重复性试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。53.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。54.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。55.（4）对照品储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置100ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.2μg/ml）。56.（5）0.25μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml）。57.（6）0.5μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液2ml置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml）。58.（7）供试品溶液：取本品，照溶出度测定法（《中国药典》现行版通则0931第三法），以含有sds0.1%0.1mol/l盐酸溶液150ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经5min、15min、30min时，用玻璃注射器取溶液10ml，同时补液10ml，溶出溶液用聚醚砜滤膜过滤，取滤液约10g，置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。平行测定6片。59.色谱条件：同实施例1。60.样品测定：（1）溶出液体积校正：精密量取加有处方量空白辅料的37℃溶出介质10ml，精密称定，取三次精密称定的平均值，校正溶出液的体积。公式如下：vweigh（ml）=10×mdis/m10ml式中：vweigh—称取溶液校正体积（ml）10—用移液管移取加有处方量空白辅料的溶出介质的体积（ml）mdis—过滤后溶出溶液的称样量（mg）m10—10ml加有处方量空白辅料的溶出介质的三次精密称定的平均值（mg）（2）精密量取对照品溶液、供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。考察各规格6份供试品溶液中1）各时间点阿法骨化醇的溶出度，2）溶出度的rsd。结果见表3、表4。61.表3重复性试验考察结果（0.25μg规格）表4重复性试验考察结果（0.5μg规格）结果表明，0.25μg规格和0.5μg规格5min时溶出度的rsd分别为6.2%和7.4%，15min时溶出度的rsd分别为3.6%和3.7%，30min时溶出度的rsd分别为3.3%和2.7%。本方法具有良好的重复性，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。62.实施例4溶液稳定性溶液的配制：同实施例3。63.色谱条件：同实施例1。64.样品测定：取配制的各规格对照品溶液及供试品溶液在室温下避光放置，分别于0小时及不同稳定性时间点取样，进行测定，记录色谱图。考察对照品溶液及供试品溶液室温下避光放置不同稳定性时间后阿法骨化醇峰面积与0小时阿法骨化醇峰面积的比值。结果见表5。65.表5溶液稳定性考察结果结果显示，0.25μg规格的对照品溶液室温下避光放置4小时内稳定，0.5μg规格的对照品溶液室温下避光放置3小时内稳定；0.25μg规格及0.5μg规格供试品溶液室温下避光放置3小时内稳定。66.实施例5溶出方法的区分力验证溶液的配制：（1）溶液制备方法同实施例3，采用不同处方工艺制备的样品。67.（2）溶出介质分别采用0.1mol/l盐酸溶液（含0.1%sds）、ph4.5磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）及ph6.8磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）。68.色谱条件：同实施例1。69.样品测定：精密量取对照品溶液、供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。考察溶出方法的区分力。结果见表6~表8。70.表6溶出方法区分力验证结果-0.1mol/l盐酸溶液（含0.1%sds）表7溶出方法区分力验证结果-ph4.5磷酸盐溶液（含0.1%sds）表8溶出方法区分力验证结果-ph6.8磷酸盐溶液（含0.1%sds）以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质；（2）在溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程中加入甲醇以消除溶剂效应；（3）采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，以甲醇和水组成为流动相。2.如权利要求1所述的检测方法，所述小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转。3.如权利要求2所述的检测方法，所述溶出介质选自0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液中的一种或多种。4.如权利要求1所述的检测方法，所述解吸附物质为0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）。5.如权利要求1所述的检测方法，所述溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程，进一步包括将从溶出仪中取出的溶出液过滤，置量瓶中称量，加入甲醇稀释定容。6.如权利要求5所述的检测方法，配制的供试品溶液及对照品溶液中含有50%甲醇。7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm
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50mm，2.7μm流动相：甲醇和水的混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm。8.如权利要求7所述的检测方法，优选的，流动相甲醇和水的体积比为95:5，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为265nm。
技术总结
本发明公开了一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，所述方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质SDS，（2）采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇和水组成为流动相。该方法专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，操作简便、绿色、经济且普遍适用，对阿法骨化醇片的制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的质量和评价提供了可靠的分析手段。骨化醇片的质量和评价提供了可靠的分析手段。
技术研发人员：李琳
受保护的技术使用者：吉斯凯（苏州）制药有限公司
技术研发日：2021.11.24
技术公布日：2022/3/7
背景技术：
：：2.阿法骨化醇化学名为(5z,7e)-9,10-开环胆甾-5,7,10(19)-三烯-1α,3β-二醇，结构式如下：阿法骨化醇可增加小肠和肾小管对钙的重吸收，抑制甲状旁腺增生，减少甲状旁腺激素合成与释放，抑制骨吸收，增加转化生长因子-b（tgf-b）和胰岛素样生长因子-i（1gf-i）合成，促进胶原和骨基质蛋白合成，调节肌肉钙代谢，促进肌细胞分化，增强肌力，增加神经肌肉协调性，减少跌倒倾向。3.阿法骨化醇片用于治疗改善慢性肾功能不全、甲状旁腺功能低下和抗维生素d佝偻病、骨软化症患者因维生素d代谢异常的症状，如：低钙血症、抽搐、骨痛及骨损害和骨质疏松症。4.目前，国际上仅有《中国药典》收载了阿法骨化醇片的质量标准，但没有对溶出度的检测进行规定。而在《中国药典》中同品种软胶囊（即阿法骨化醇软胶囊）的质量标准中同样没有对溶出度的检测进行规定。对于他骨化醇类药物，《中国药典》和usp中维生素d2（麦角骨化醇）及维生素d3（胆骨化醇）的口服固体制剂标准也均未制定溶出度检查项。而针对阿法骨化醇片的溶出度检测方法及相关研究也鲜有报道。5.对于口服固体制剂，作为评价药物质量的重要手段，溶出度的研究具有重要意义。由于阿法骨化醇片的规格仅为0.25μg和0.5μg，其溶出度检测在灵敏度方面存在很大挑战，此外，由于阿法骨化醇脂溶性强，在溶出过程及取样过程中极易产生吸附损失，也对阿法骨化醇片溶出度的准确测定带来了极大挑战。6.现有文献（quantificationofalfacalcidoltabletsdissolutioncontentbychemicalderivatizationandlc-ms，yangliu等，journalofanalyticalmethodsinchemistry，2020，1-6）公开了一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，其中的溶出液的制备采用的方法为：溶出装置为桨法，500mlph6.8磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）为溶出介质，转速为每分钟50转，取样后溶出液经过滤、脱盐提取、加入内标物质再衍生化处理后，用液相-质谱联用技术（lc-ms）进行定量分析。该方法，前处理方法复杂，使用的溶剂多且具有较高毒性，对检测技术要求较高，不具有普遍适用性；此外，方法研究采用的溶出介质单一，不能对产品溶出特性进行系统全面的研究。7.为改进现有技术的不足，需要针对阿法骨化醇片开发一种专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，操作简便、绿色、经济且普遍适用的溶出度检测的方法，此外，该方法还应参照《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》采用多种不同ph的溶出介质进行考察研究。本发明人经过大量的测试条件的筛选研究，惊奇的发现通过改变溶出液的制备及检测方法，不但可以减少操作步骤，避免使用高毒性溶剂，还能够大大提高检测灵敏度，克服了现有技术存在的缺陷，并通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面，研究结果证明，本方法对阿法骨化醇片的不同制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的开发和评价提供了可靠的分析手段。技术实现要素：8.本发明的目的在于建立一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法能够专属、灵敏、准确、精密地对阿法骨化醇片的溶出液进行定量检测，在减少操作步骤、避免使用高毒性溶剂的同时，大大提高了检测灵敏度；通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面。9.为实现本发明的目的，提供如下实施方案。10.在一实施方案中，一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质；（2）在溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程中加入甲醇以消除溶剂效应（3）采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，以甲醇和水组成为流动相。11.优选的，上述本发明的检测方法，所述小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转，所述溶出介质选自0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液中的一种或多种；所述解吸附物质为0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）。12.优选的，上述本发明的检测方法，所述溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程，进一步包括将从溶出仪中取出的溶出液过滤，置量瓶中称量，加入甲醇稀释定容；配制的供试品溶液及对照品溶液中含有50%甲醇。13.优选的，上述的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇-水（94:6）~甲醇-水（96:4）甲醇和水的混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm。14.更优选的，流动相甲醇和水的体积比为95:5，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为265nm。15.在一实施方案中，本发明的一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，包含（1）采用《中国药典》收载的小杯法制得溶出液使方法达到较好的检测灵敏度；通过在溶出介质中加入少量解吸附物质来阻止主成分在溶出仪中的吸附；（2）溶出液中加入适量甲醇以消除溶剂效应，（3）采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；以甲醇和水组成为流动相进行梯度洗脱；并采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器进行阿法骨化醇片溶出度的检测。16.在上述实施方案中，本发明的方法，采用《中国药典》收载的小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转。17.在上述实施方案中，本发明的方法，溶出介质选用0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液，并均添加0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）作为解吸附物质。18.在上述实施方案中，本发明的方法，溶出液经玻璃注射器从溶出仪中取出后，需经聚醚砜滤膜过滤，并加入适量甲醇以消除溶剂效应，使最终的溶剂中含有50%甲醇。19.在上述实施方案中，本发明的方法，为使溶出供试品溶液和对照品溶液具有相同的溶剂组成，从而避免不同溶剂系统中主成分响应因子的差异，需要使配制的对照品溶液中含有50%甲醇。20.在上述实施方案中，本发明的方法，为避免溶出溶液定量稀释过程中，多次转移时可能造成的吸附，需要对溶出液的计量采用称量的方式，在溶出液的续滤液精确称定重量后，立即加入甲醇稀释定容。21.在上述实施方案中，本发明的方法，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇和水混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm在一具体实施方案中，本发明的一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，包含：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml（优选150ml），转速为每分钟25转~50转（优选50转）；（2）溶出介质选用0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液，并均添加0.1%~0.2%（优选0.1%）十二烷基硫酸钠（sds）作为解吸附物质；（3）溶出液经玻璃注射器从溶出仪中取出后，需经聚醚砜滤膜过滤，并加入适量甲醇以消除溶剂效应，使最终的溶剂中含有50%甲醇；（4）为使溶出供试品溶液和对照品溶液具有相同的溶剂组成，从而避免不同溶剂系统中主成分响应因子的差异，需要使配制的对照品溶液中含有50%甲醇；（5）避免溶出溶液定量稀释过程中，多次转移时可能造成的吸附，需要对溶出液的计量采用称量的方式，在溶出液的续滤液精确称定重量后，立即加入甲醇稀释定容；（6）采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，优选agilentporoshell120ec-c184.6mm×50mm，2.7μm流动相：甲醇和水的混合溶液，甲醇和水的体积比为94:6~96:4，优选为95:5流速：0.9ml/min~1.1ml/min，优选1.0ml/min柱温：39℃~41℃，优选40℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器（优选agilentg4212a）检测波长：263nm~267nm，优选265nm。22.本发明的检测方法的有益技术效果在于：（1）本发明的方法，采用《中国药典》收载的小杯法，使用较少体积的溶出介质，使制得的溶出液浓度较高，帮助方法达到较好的检测灵敏度，此外，通过采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器，最终克服了极低剂量阿法骨化醇片溶出度检测的灵敏度问题。方法验证结果表明，本方法的定量限为0.3ng/ml，而现有文献的定量限为0.8ng/ml，本方法具有更好的检测灵敏度。具体验证数据参见实施例1灵敏度试验。23.（2）本发明的方法，基于阿法骨化醇的脂溶性，研究明确了在溶出过程及取样过程中避免其产生吸附损失的方法，能够确保检测的准确度。具体验证数据参见实施例2准确度试验。24.（3）本发明的方法，通过采用多种溶出介质，使该方法对阿法骨化醇片的研究更为系统全面，研究结果证明，本方法对阿法骨化醇片的制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的开发和评价提供了可靠的分析手段。具体验证数据参见实施例5溶出方法的区分力验证。25.（4）本发明的方法，采用高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；以甲醇和水组成为流动相进行梯度洗脱；溶出液中加入适量甲醇以消除溶剂效应，并采用大进样体积搭配高灵敏度紫外检测器进行阿法骨化醇片溶出度的检测。与现有文献相比，本发明前处理方法简单，步骤少，使用的溶剂少且毒性低，更为绿色、经济；采用常见的紫外检测技术，更具有普遍适用性。26.综上，本发明建立的阿法骨化醇片溶出度的检测方法，按国内外相关指导原则进行了方法验证，表明本方法专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，且在整体设计上使方法具有操作简便、绿色、经济及普遍适用的优点，可用于阿法骨化醇片的质量研究，并对类似品种具有借鉴价值。附图说明27.图1为0.1mol/l盐酸溶液介质中供试品溶液色谱图图2为ph4.5磷酸盐缓冲液介质中供试品溶液色谱图图3为ph6.8磷酸盐缓冲液介质中供试品溶液色谱图图4为0.1mol/l盐酸溶液介质中溶出方法区分力曲线图图5为ph4.5磷酸盐缓冲液介质中溶出方法区分力曲线图图6为ph6.8磷酸盐缓冲液介质中溶出方法区分力曲线图具体实施方式28.下面通过实施例对本发明做进一步的说明，以帮助理解本发明的实质，但不以任何方式限制本发明的范围。29.实施例1灵敏度试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。30.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。31.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。32.（4）阿法骨化醇储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置50ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约40ng/ml）。33.（5）定量限溶液：取阿法骨化醇储备液2ml，置250ml量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.3ng/ml）。34.色谱条件：本试验选用agilentporoshell120ec-c184.6mm×50mm，2.7μm色谱柱，以甲醇-水（95:5）为流动相，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样体积为1ml，检测器为agilentg4212a，检测波长为265nm。35.样品测定：精密量取定量限溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，连续进样6次，记录色谱图。考察阿法骨化醇色谱峰的信噪比（s/n）与阿法骨化醇峰面积的rsd。结果见表1。36.表1灵敏度试验考察结果结果表明，定量限溶液连续进样6次，阿法骨化醇色谱峰的s/n均大于10，峰面积的rsd为1.4%。本方法具有较高的检测灵敏度，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。37.实施例2准确度试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。38.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。39.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。40.（4）对照品储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.2μg/ml）。41.（5）0.25μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml，置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml）。42.（6）0.5μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液2ml，置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml）。43.（7）回收率储备液-1：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2.5ml，置200ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.25μg/ml）。44.（8）回收率储备液-2：精密量取回收率储备液-110ml，置25ml量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.1μg/ml）。45.（9）0.25μg规格40%浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质1ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-21ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.3ng/ml），平行配制3份。46.（10）0.25μg规格100%（0.5μg规格50%）浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质2.5ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-22.5ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml），平行配制3份。47.（11）0.25μg规格200%（0.5μg规格100%）浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质2ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-12ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml），平行配制3份。48.（12）0.5μg规格150%浓度水平供试品溶液：用50ml移液管分三次将150ml溶出介质移入溶出杯中，精密移出介质3ml后，加入空白辅料约85mg，加转速搅拌使溶解；精密移入回收率储备液-13ml，启动50rpm转速后1min开始取样，过滤，取续滤液置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约2.4ng/ml），平行配制3份。49.色谱条件：同实施例1。50.样品测定：（1）溶出液体积校正：精密量取加有处方量空白辅料的37℃溶出介质10ml，精密称定，取三次精密称定的平均值，校正溶出液的体积。公式如下：vweigh（ml）=10×mdis/m10ml式中：vweigh—称取溶液校正体积（ml）10—用移液管移取加有处方量空白辅料的溶出介质的体积（ml）mdis—过滤后溶出溶液的称样量（mg）m10—10ml加有处方量空白辅料的溶出介质的三次精密称定的平均值（mg）（2）精密量取对照品溶液、各浓度水平供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。前三个浓度水平分别作为0.25μg规格的40%、100%、200%浓度水平供试品溶液，后三个浓度水平分别作为0.5μg规格50%、100%、150%浓度水平供试品溶液，考察1）各规格9份供试品溶液各自的回收率，2）9份供试品溶液回收率的rsd。结果见表2。51.表2准确度试验考察结果结果表明，0.25μg规格和0.5μg规格三个浓度水平9份供试品溶液的回收率分别在95.9%~102.5%和96.1%~100.2%范围内，9份供试品溶液回收率的rsd分别为2.3%和1.4%。本方法具有较高的准确度，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。52.实施例3重复性试验溶液的配制：（1）溶出介质：精密量取盐酸9ml，溶解于1000ml脱气纯化水，加入sds约1g（0.1%），搅拌使溶解混匀。53.（2）溶剂-1：量取甲醇800ml、纯化水200ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。54.（3）溶剂-2：量取甲醇500ml、溶出介质500ml，混匀，超声脱气，放至室温，即得。55.（4）对照品储备液：取阿法骨化醇对照品约2mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置100ml棕色量瓶中，用溶剂-1稀释至刻度，摇匀（含阿法骨化醇约0.2μg/ml）。56.（5）0.25μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约0.8ng/ml）。57.（6）0.5μg规格对照品溶液：精密量取对照品储备液2ml置250ml棕色量瓶中，用溶剂-2稀释至刻度，摇匀，即得（含阿法骨化醇约1.6ng/ml）。58.（7）供试品溶液：取本品，照溶出度测定法（《中国药典》现行版通则0931第三法），以含有sds0.1%0.1mol/l盐酸溶液150ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经5min、15min、30min时，用玻璃注射器取溶液10ml，同时补液10ml，溶出溶液用聚醚砜滤膜过滤，取滤液约10g，置20ml棕色量瓶中，精密称定，立即加甲醇适量，振摇，再加甲醇至刻度附近，冷却至室温后，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。平行测定6片。59.色谱条件：同实施例1。60.样品测定：（1）溶出液体积校正：精密量取加有处方量空白辅料的37℃溶出介质10ml，精密称定，取三次精密称定的平均值，校正溶出液的体积。公式如下：vweigh（ml）=10×mdis/m10ml式中：vweigh—称取溶液校正体积（ml）10—用移液管移取加有处方量空白辅料的溶出介质的体积（ml）mdis—过滤后溶出溶液的称样量（mg）m10—10ml加有处方量空白辅料的溶出介质的三次精密称定的平均值（mg）（2）精密量取对照品溶液、供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。考察各规格6份供试品溶液中1）各时间点阿法骨化醇的溶出度，2）溶出度的rsd。结果见表3、表4。61.表3重复性试验考察结果（0.25μg规格）表4重复性试验考察结果（0.5μg规格）结果表明，0.25μg规格和0.5μg规格5min时溶出度的rsd分别为6.2%和7.4%，15min时溶出度的rsd分别为3.6%和3.7%，30min时溶出度的rsd分别为3.3%和2.7%。本方法具有良好的重复性，能够满足阿法骨化醇片溶出度的检测要求。62.实施例4溶液稳定性溶液的配制：同实施例3。63.色谱条件：同实施例1。64.样品测定：取配制的各规格对照品溶液及供试品溶液在室温下避光放置，分别于0小时及不同稳定性时间点取样，进行测定，记录色谱图。考察对照品溶液及供试品溶液室温下避光放置不同稳定性时间后阿法骨化醇峰面积与0小时阿法骨化醇峰面积的比值。结果见表5。65.表5溶液稳定性考察结果结果显示，0.25μg规格的对照品溶液室温下避光放置4小时内稳定，0.5μg规格的对照品溶液室温下避光放置3小时内稳定；0.25μg规格及0.5μg规格供试品溶液室温下避光放置3小时内稳定。66.实施例5溶出方法的区分力验证溶液的配制：（1）溶液制备方法同实施例3，采用不同处方工艺制备的样品。67.（2）溶出介质分别采用0.1mol/l盐酸溶液（含0.1%sds）、ph4.5磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）及ph6.8磷酸盐缓冲液（含0.1%sds）。68.色谱条件：同实施例1。69.样品测定：精密量取对照品溶液、供试品溶液，按相应色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。考察溶出方法的区分力。结果见表6~表8。70.表6溶出方法区分力验证结果-0.1mol/l盐酸溶液（含0.1%sds）表7溶出方法区分力验证结果-ph4.5磷酸盐溶液（含0.1%sds）表8溶出方法区分力验证结果-ph6.8磷酸盐溶液（含0.1%sds）以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，该方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质；（2）在溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程中加入甲醇以消除溶剂效应；（3）采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，以甲醇和水组成为流动相。2.如权利要求1所述的检测方法，所述小杯法，溶出介质体积为150ml~250ml，转速为每分钟25转~50转。3.如权利要求2所述的检测方法，所述溶出介质选自0.1mol/l盐酸、ph4.5磷酸盐缓冲液和ph6.8磷酸盐缓冲液中的一种或多种。4.如权利要求1所述的检测方法，所述解吸附物质为0.1%~0.2%十二烷基硫酸钠（sds）。5.如权利要求1所述的检测方法，所述溶出供试品溶液和对照品溶液配制过程，进一步包括将从溶出仪中取出的溶出液过滤，置量瓶中称量，加入甲醇稀释定容。6.如权利要求5所述的检测方法，配制的供试品溶液及对照品溶液中含有50%甲醇。7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱仪进行阿法骨化醇片溶出度的检测，具体条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm
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50mm，2.7μm流动相：甲醇和水的混合溶液，其中甲醇和水的体积比为94:6~96:4流速：0.9ml/min~1.1ml/min柱温：39℃~41℃进样体积：1ml检测器类型：高灵敏度（60mm检测光程）紫外检测器检测波长：263nm~267nm。8.如权利要求7所述的检测方法，优选的，流动相甲醇和水的体积比为95:5，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为265nm。
技术总结
本发明公开了一种阿法骨化醇片溶出度的检测方法，所述方法包括：（1）采用《中国药典》收载的小杯法，并在溶出介质中加入少量解吸附物质SDS，（2）采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇和水组成为流动相。该方法专属性强、灵敏度高、精密度好且准确度高，操作简便、绿色、经济且普遍适用，对阿法骨化醇片的制备工艺具有良好的区分力，为阿法骨化醇片的质量和评价提供了可靠的分析手段。骨化醇片的质量和评价提供了可靠的分析手段。
技术研发人员：李琳
受保护的技术使用者：吉斯凯（苏州）制药有限公司
技术研发日：2021.11.24
技术公布日：2022/3/7
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