一种细胞通用冻存液的制作方法

1.本发明涉及细胞及生物工程学领域，具体涉及一种细胞通用冻存液。


背景技术：

2.细胞冻存时，如果细胞中不添加冻存保护成分，由于细胞内和外环境中的水会形成冰晶导致细胞发生机械损伤、电解质浓度升高等一系列变化，最终导致细胞的死亡。因此添加细胞冻存保护剂对于细胞的冻存是必须的，目前，实验室通用的细胞保存手段是使用90%的新生胎牛血清加10%dmso，其中血清成分由于批次不确定、成分不确定对细胞造成一定突发性结果，如细胞污染等，且一些细胞的冻存并不可以使用血清，如干细胞等一系列细胞，用血清冻存可能导致干细胞的分化。而dmso对细胞具有一定的毒副作用。因此，发明一种细胞通用的且易制备的细胞冻存液显得尤为重要。


技术实现要素：

3.发明一种对所有细胞通用的、甚至是对动物精子有一定保护效果的、无血清、易制备的细胞冻存液。本发明提供一种细胞通用冻存液，其中：人血清白蛋白的含量为40%，dmso的含量为3%，甘油的含量为7%，复方电解质注射液的含量为20%，右旋糖苷的含量为30%。
4.本发明的有益效果如下：以本发明提供的细胞通用冻存液,结合了各冻存成分的特点进行最优配比，显著提高了细胞的存活率，并且避免了血清的使用，易制备、易保存、复苏后的细胞活性极高且避免了血清存在的潜在危险。
附图说明
5.图1为实施例、对比例1-4的细胞冻存一周后细胞复苏活率数据结果图；图2为实施例、对比例1-4的细胞冻存三个月后细胞复苏活率数据结果图；图3为实施例、对比例1-4的细胞冻存六个月后细胞复苏活率数据结果图；图4位实施例、对比例1-4的细胞冻存六个月后细胞复苏培养三天后的细胞数量结果图；
具体实施方式
6.为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本申请作进一步说明。
实施例
7.本实施例提供了提供一种细胞通用冻存液配方。以10ml为例：人血清白蛋白4ml，dmso 0.3ml，甘油0.7ml，复方电解质2ml，右旋糖苷3ml。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
8.对比例1本实施例还设置了对比例1、对比例2、对比例3、对比例4，对比例1、2、3、4均为实施例的变形，其中对比例1与实施例的区别在于冻存液配方中的dmso含量从原先的、3%变为10%，甘油不添加，具体配方为：人血清白蛋白4ml，添加1 ml的dmso，2ml的复方电解质注射液，3ml的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
9.对比例2对比例2与实施例的区别在于冻存液配方中的甘油含量从原先的7%变为10%ml，dmso不添加，具体配方为：人血清白蛋白4ml，添加1ml的甘油，2ml的复方电解质注射液，3ml的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
10.对比例3对比例3与实施例的区别在于冻存液配方中的人血清白蛋白含量从原先的40%变为20%，复方电解质注射液含量从原先的20%变为40%，具体配方为：人血清白蛋白2ml，添加0.3ml的dmso，添加0.7ml的甘油，4ml的复方电解质注射液，3ml的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
11.对比例4对比例3与实施例的区别在于冻存液配方中的人血清白蛋白含量从原先的40%变为60%，复方电解质注射液含量从原先的20%变为10%，右旋糖苷含量从原先的30%变为20%，具体配方为：人血清白蛋白6ml，添加0.3ml的dmso，添加0.7ml的甘油，1ml的复方电解质注射液，2ml的右旋糖苷。将上述物质混合形成无血清细胞冻存液。
12.使用五种不同的细胞冻存液冻存同一批间充质干细胞，每种冻存液冻存十支细胞，每支冻存5
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105细胞，在细胞冻存满一周、三月、六月的时候分别各组取出三支细胞进行复苏并统计细胞存活率进行汇总求平均值。在细胞冻存六个月后复苏细胞对细胞进行三天的培养，分别统计各组细胞的细胞数量。
13.最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。


技术特征：
1.一种细胞通用冻存液，其特征在于：其成分主要包括人血清白蛋白、dmso、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷。2.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液，其特征在于：人血清白蛋白的浓度范围在20-60%、dmso的浓度范围在5%-10%；甘油的度范围在0%-10%；复方电解质注射液的度范围在10-50%，右旋糖苷的度范围在10-60%。3.权利要求1或2所述的一种细胞通用冻存液，其特征在于：人血清白蛋白、dmso、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷的浓度比为(2-6)∶(0.5-1)∶(0-1)∶(1-5)∶(1-6)。4.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液，其特征在于：人血清白蛋白、dmso、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷的浓度比:4∶0.3∶0.7∶2∶3。5.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液，其特征在于：浓度40%的人血清白蛋白为最优选择，浓度3%的dmso含量为最优选择，浓度7%的甘油含量为最优选择，浓度20%的复方电解质注射液为最优选择，浓度30%的右旋糖苷为最优选择。6.如权利要求1所述的一种细胞通用冻存液，其特征在于：通用性不止局限在细胞，该细胞冻存液也可以作为精子冻存液使用。

技术总结
本发明提供一种细胞通用冻存液，其成分主要包括人血清白蛋白、DMSO、甘油、复方电解质注射液、右旋糖苷。其中：人血清白蛋白的含量为40%，DMSO的含量为3%，甘油的含量为7%，复方电解质注射液的含量为20%，右旋糖苷的含量为30%。本发明通过结合各冻存成分的特点进行最优配比，显著提高了细胞的存活率，并且避免了血清的使用，降低了污染源。降低了污染源。降低了污染源。


技术研发人员：贾正虎 武晓丽 骆静 孟子愉 杨成茂
受保护的技术使用者：天津尤金生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.25
技术公布日：2022/3/8