一种可控的磷脂胶束的制备方法

1.本发明涉及一种磷脂胶束的制备方法。


背景技术：

2.磷脂是组成生物膜的基本成分，磷脂膜，磷脂胶束等是研究生物膜特性如跨膜电位、磷脂脂笩、膜间信息传导等研究的最佳模型。目前磷脂胶束的制备方法主要有超声法、更改溶剂法、自然水化法等等，这些方法主要依靠磷脂分子的自身组装，形成的胶束在形态与尺寸不均一，缺乏可控性。其中，还没有利用电场可控制备磷脂胶束的方法。


技术实现要素：

3.本发明的目的是要解决现有制备磷脂胶束的方法主要依靠磷脂分子的自身组装，形成的胶束在形态与尺寸不均一，缺乏可控性的问题，而提供一种可控的磷脂胶束的制备方法。
4.本发明利用施加的电场，促进分子本身发生旋转，导致分子重新组合形成胶束，从而提供一种可控的磷脂胶束的制备方法；该发明方法操作简单、制备速度快、可控性好。
5.一种可控的磷脂胶束的制备方法，是按以下步骤完成的：
6.一、制备小磷脂囊泡：
7.去除磷脂氯仿溶液的溶剂，再放入真空干燥箱中充分干燥，完全除去氯仿溶剂，再加入去离子水，然后在加热条件下超声，最后利用微型挤压器进行挤压，得到尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液；
8.二、制备石墨烯薄层电极基底：
9.将透明胶带按压粘在大块石墨烯平层表面，快速平行撕起，在透明胶带上得到平整的石墨烯薄层，即为石墨烯薄层电极基底；
10.三、将尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液和盐溶液依次滴加在石墨烯薄层电极基底上，再在50℃～70℃下孵育，再冲洗样品，得到孵育后的薄层电极；
11.四、电形成磷脂胶束：
12.在50℃～70℃的温度下，设置电化学电位-2v～+2v，将孵育后的薄层电极与铂丝电极分别与电化学工作站的电极相连接，反应2min～10min，在薄层电极上得到不同深度和宽度的磷脂胶束；在40℃以下，磷脂胶束保持稳定的胶束形态。
13.本发明的优点：
14.一、本发明将片层石墨烯为电极基底，在基底表面先铺展磷脂双层膜，通过施加一定的交流电场，利用电场控制石墨烯表面磷脂胶束的形成及形成状态，该方法具有设计独特、操作简单、形成速度快、制备周期短、可控性好等优点；
15.二、本发明利用平整度极高的石墨烯薄层为电极基底，实现电场可控制备磷脂胶束的方法，为扩大磷脂胶束在细胞生物学、生物化学、仿生学领域的相关磷脂膜电学特性研究提供解决思路，为在医药领域开展磷脂胶束对难溶性药物的增溶性，促进吸收提高药效
等研究提供可靠的技术方法；
16.三、本发明利用导电且平整的石墨烯薄层为电极基底，以电化学工作站提供的电位电压实现可控制备磷脂胶束的新方法，填补了磷脂胶束制备方法的空白，扩大了石墨烯的应用范围，且具备优异的可控性。
17.本发明可获得一种可控的磷脂胶束。
附图说明
18.图1为实施例1中制备孵育后的薄层电极的示意图；
19.图2为实施例1中制备二棕榈酰磷脂酰胆碱磷脂胶束的示意图；
20.图3为实施例1中制备二棕榈酰磷脂酰胆碱磷脂胶束的图片。
具体实施方式
21.以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。
22.具体实施方式一：本实施方式一种可控的磷脂胶束的制备方法，是按以下步骤完成的：
23.一、制备小磷脂囊泡：
24.去除磷脂氯仿溶液的溶剂，再放入真空干燥箱中充分干燥，完全除去氯仿溶剂，再加入去离子水，然后在加热条件下超声，最后利用微型挤压器进行挤压，得到尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液；
25.二、制备石墨烯薄层电极基底：
26.将透明胶带按压粘在大块石墨烯平层表面，快速平行撕起，在透明胶带上得到平整的石墨烯薄层，即为石墨烯薄层电极基底；
27.三、将尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液和盐溶液依次滴加在石墨烯薄层电极基底上，再在50℃～70℃下孵育，再冲洗样品，得到孵育后的薄层电极；
28.四、电形成磷脂胶束：
29.在50℃～70℃的温度下，设置电化学电位-2v～+2v，将孵育后的薄层电极与铂丝电极分别与电化学工作站的电极相连接，反应2min～10min，在薄层电极上得到不同深度和宽度的磷脂胶束；在40℃以下，磷脂胶束保持稳定的胶束形态。
30.具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同点是：步骤一中所述的磷脂为二棕榈酰磷脂酸或二棕榈酰磷脂酰胆碱。其它步骤与具体实施方式一相同。
31.具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤一中去除磷脂氯仿溶液的溶剂，再放入20℃～40℃的真空干燥箱中干燥20h～24h，完全除去氯仿溶剂，再加入去离子水，然后在50℃～70℃下超声。其它步骤与具体实施方式一或二相同。
32.具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤一中所述的磷脂的质量与去离子水的体积比为(1g～2g):(1ml～2ml)。其它步骤与具体实施方式一至三相同。
33.具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤一中所
述的超声的功率为200w～300w，超声的时间为5min～10min。其它步骤与具体实施方式一至四相同。
34.具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤一中所述的微型挤压器所用的滤膜孔径为100nm～200nm。其它步骤与具体实施方式一至五相同。
35.具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤二中所述的石墨烯薄层电极基底的长大于0.5cm，宽大于0.5cm。其它步骤与具体实施方式一至六相同。
36.具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是：步骤三中所述的尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液与盐溶液的体积比为(10μl～50μl):(100μl～200μl)。其它步骤与具体实施方式一至七相同。
37.具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同点是：所述的孵育的时间为30min～60min；步骤三中所述的盐溶液的浓度为130mmol/l～150mmol/l；所述的盐溶液为nacl溶液或kcl溶液。其它步骤与具体实施方式一至八相同。
38.具体实施方式十：本实施方式是步骤三中使用浓度为130mmol/l～150mmol/l的nacl溶液或kcl溶液冲洗样品，nacl溶液或kcl溶液与尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液的体积比为2ml:(10μl～50μl)。
39.采用以下实施例验证本发明的有益效果：
40.实施例1：结合图1～图3说明本实施例，本实施例一种可控的磷脂胶束的制备方法，是按以下步骤完成的：
41.一、制备小磷脂囊泡：
42.将含1g二棕榈酰磷脂酰胆碱的氯仿溶液，除去溶剂后放入温度为26℃的真空干燥箱中干燥24h，完全除去氯仿溶剂，再加入1ml去离子水，然后在50℃和超声功率为250w下超声5min，最后利用利用孔径为100nm的滤膜进行挤压，得到尺寸为100nm的小磷脂囊泡溶液；
43.二、制备石墨烯薄层电极基底：
44.将透明胶带按压粘在大块石墨烯平层表面，快速平行撕起，在透明胶带上得到平整的石墨烯薄层，即为石墨烯薄层电极基底；
45.步骤二中所述的石墨烯薄层电极基底的长大于0.5cm，宽大于0.5cm；
46.三、将10μl尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液和150μl浓度为150mmol/l的kcl溶液依次滴加在石墨烯薄层电极基底上，再在50℃下孵育40min，再使用2ml浓度为150mmol/l的kcl溶液轻轻冲洗样品，得到孵育后形成在薄层电极表面的磷脂单层膜；
47.步骤三中所述的孵育后的薄层电极表面为磷脂单层膜；
48.四、电形成磷脂胶束：
49.在50℃的温度下，设置电化学电位1v，将孵育后的薄层电极与铂丝电极分别与电化学工作站的电极相连接，反应10min，在薄层电极上得到不同深度和宽度的二棕榈酰磷脂酰胆碱磷脂胶束；在40℃以下，二棕榈酰磷脂酰胆碱磷脂胶束保持稳定的胶束形态。
50.图3为实施例1中制备的二棕榈酰磷脂酰胆碱磷脂胶束的图片。
51.从图3可知，实施例1制备的磷脂胶束排列整齐，胶束宽度约为6nm，尺寸均一，说明采用本发明制备磷脂胶束的方法具备良好的可控性。

技术特征：
1.一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于一种可控的磷脂胶束的制备方法是按以下步骤完成的：一、制备小磷脂囊泡：去除磷脂氯仿溶液的溶剂，再放入真空干燥箱中充分干燥，完全除去氯仿溶剂，再加入去离子水，然后在加热条件下超声，最后利用微型挤压器进行挤压，得到尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液；二、制备石墨烯薄层电极基底：将透明胶带按压粘在大块石墨烯平层表面，快速平行撕起，在透明胶带上得到平整的石墨烯薄层，即为石墨烯薄层电极基底；三、将尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液和盐溶液依次滴加在石墨烯薄层电极基底上，再在50℃～70℃下孵育，再冲洗样品，得到孵育后的薄层电极；四、电形成磷脂胶束：在50℃～70℃的温度下，设置电化学电位-2v～+2v，将孵育后的薄层电极与铂丝电极分别与电化学工作站的电极相连接，反应2min～10min，在薄层电极上得到不同深度和宽度的磷脂胶束；在40℃以下，磷脂胶束保持稳定的胶束形态。2.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤一中所述的磷脂为二棕榈酰磷脂酸或二棕榈酰磷脂酰胆碱。3.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤一中去除磷脂氯仿溶液的溶剂，再放入20℃～40℃的真空干燥箱中干燥20h～24h，完全除去氯仿溶剂，再加入去离子水，然后在50℃～70℃下超声。4.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤一中所述的磷脂的质量与去离子水的体积比为(1g～2g):(1ml～2ml)。5.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤一中所述的超声的功率为200w～300w，超声的时间为5min～10min。6.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤一中所述的微型挤压器所用的滤膜孔径为100nm～200nm。7.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤二中所述的石墨烯薄层电极基底的长大于0.5cm，宽大于0.5cm。8.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤三中所述的尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液与盐溶液的体积比为(10μl～50μl):(100μl～200μl)。9.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于所述的孵育的时间为30min～60min；步骤三中所述的盐溶液的浓度为130mmol/l～150mmol/l；所述的盐溶液为nacl溶液或kcl溶液。10.根据权利要求1所述的一种可控的磷脂胶束的制备方法，其特征在于步骤三中使用浓度为130mmol/l～150mmol/l的nacl溶液或kcl溶液冲洗样品，nacl溶液或kcl溶液与尺寸为100nm～200nm的小磷脂囊泡溶液的体积比为2ml:(10μl～50μl)。

技术总结
一种可控的磷脂胶束的制备方法，它涉及一种磷脂胶束的制备方法。本发明的目的是要解决现有制备磷脂胶束的方法主要依靠磷脂分子的自身组装，形成的胶束在形态与尺寸不均一，缺乏可控性的问题。方法：一、制备小磷脂囊泡；二、制备石墨烯薄层电极基底；三、孵育；四、电形成磷脂胶束。本发明将片层石墨烯为电极基底，在基底表面先铺展磷脂双层膜，通过施加一定的交流电场，利用电场控制石墨烯表面磷脂胶束的形成及形成状态，该方法具有设计独特、操作简单、形成速度快、制备周期短、可控性好等优点。本发明可获得一种可控的磷脂胶束。明可获得一种可控的磷脂胶束。明可获得一种可控的磷脂胶束。


技术研发人员：毕洪梅 史国滨
受保护的技术使用者：广东石油化工学院
技术研发日：2021.12.10
技术公布日：2022/3/8