一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法与流程

1.本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法。


背景技术：

2.中草药作为饲料添加剂或混饲药剂，是近年来兽医中草药应用的一个重要方面，也是饲料添加剂的一个独特系列。由于中药属纯天然，资源丰富，容易获取，毒副作用小，在动物体内和肉蛋奶中无有害残留，可以给人们创造绿色安全食品。
3.在奶牛养殖过程中，在高温的夏季，奶牛由于热应激等，诱发乳腺炎，导致产奶量下降，奶的品质下降，因此。如何针对奶牛养殖，开发无毒、安全的中药发酵饲料添加剂，缓解奶牛热应激反应，提高奶的产量，对反刍奶牛的养殖具有重要的意义。


技术实现要素：

4.本发明公开了一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，制备的中药发酵饲料添加剂赖氨酸含量高，将其添加到奶牛饲料中，可提高营养供应，降低热应激反应，提高奶牛高温季节产奶量。
5.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
6.一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
7.(1)粉料混合：
8.将槐花粉、膨润土、蛭石粉、稀土、豆粕粉、葡萄糖混合，得到混合料a；
9.将党参粉、炙甘草粉、黄芪粉、白术粉、栀子粉、淫羊藿粉混合，得到混合料b；
10.(2)初次发酵：
11.取混合料a，接种嗜酸乳杆菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液，并添加纤维素酶、木质素酶和水，静止发酵，得到初次发酵醪液aa；
12.(3)二次发酵：
13.另取混合料a，与混合料b混合，得到混合料aa2；
14.混合料aa2与初次发酵醪液aa混合后，接种植物乳杆菌菌液、丁酸梭菌菌液、酵母菌液，静止发酵，得到二次发酵基质bb；
15.(3)三次发酵：
16.另取酵母菌液，加入蛭石粉、膨润土、蛋白胨和葡萄糖，过夜培养，然后加入黄芪粉，继续培养，得到酵母菌二次培养液；
17.另取混合料b，与二次发酵基质bb混合，加入木质素酶、酵母菌二次培养液，静止发酵，得到发酵基质cc；
18.(4)呼吸袋发酵：
19.将发酵基质cc装入呼吸袋，封口后静止发酵，得到中药发酵饲料添加剂。
20.本发明所使用的原料中，党参粉可提高免疫力，炙甘草粉起到调和作用，黄芪粉补
气，白术粉补胃健脾，栀子粉清热利湿、凉血解毒，淫羊藿粉主要修复乳房系统；各原料相互配合，进一步提高消化能力，增强免疫力，提高对热应激的抵抗力；同时槐花清热安神配合栀子清热利湿，可有效降低热应激反应。此外，各原料混合，经过发酵、酶解后可提高赖氨酸含量，提高营养吸收和营养均衡，有助于提高对热应激的抵抗力，提高免疫力，修复生殖系统，提高产奶量。通过好氧菌枯草芽孢杆菌消耗料层中的氧气，为酵母菌厌氧代谢和嗜酸乳杆菌的代谢提供适宜的环境，进而促进有益代谢物产的生，在强化营养吸收的同时，增强对热应激的抵抗力。膨润土、蛭石粉、稀土对菌株的代谢有调控作用，对酶的活性有促进作用，对奶牛机体代谢有调控作用。
21.综上，本发明通过中药、菌、酶、微量元素等形成一个协同有机体系，提高赖氨酸含量，促进营养消化吸收，增强中药药效，提升免疫力，预防治疗乳房炎症，从而增强对热应激的抵抗力，提高产奶量。
22.优选地，步骤(1)中，
23.槐花粉、膨润土、蛭石粉、稀土、豆粕粉、葡萄糖质量比为8：1：1：1：2：1；
24.党参粉、炙甘草粉、黄芪粉、白术粉、栀子粉、淫羊藿粉质量比为0.2：3：1：1.5：2：0.2。
25.优选地，步骤(2)中，
26.静止发酵程序为：
27.发酵容器纱布封口，37℃发酵36h；
28.去掉纱布，密封盖封口，37℃发酵48h；
29.去掉密封盖，加入纤维素酶、木质素酶，纱布封口，28℃发酵36h。
30.优选地，步骤(2)中，
31.静止发酵前每30kg混合料a加入嗜酸乳杆菌菌液20l，枯草芽孢杆菌菌液20l，纤维素酶1kg，木质素酶2kg，水200kg；
32.去掉密封盖后，每30kg混合料a加入纤维素酶1kg，木质素酶2kg。
33.优选地，步骤(3)中，
34.发酵容器不加盖，于无菌房中，35℃发酵36h。
35.优选地，步骤(3)中，
36.混合料a与混合料b按1:4质量比混合得到混合料aa2；
37.混合料aa2与初次发酵醪液aa按照1.5：1-2.5：1质量比混合；并且每600kg混合料aa2添加植物乳杆菌菌液5l、丁酸梭菌菌液3l、酵母菌液10l。
38.优选地，步骤(4)中，
39.酵母菌液中加入质量分数为0.2％的蛭石粉、质量分数为0.1％的膨润土、质量分数为1％的蛋白胨和质量分数为1％的葡萄糖，发酵容器纱布封口，28℃培养16h，然后加入质量分数为0.2％的黄芪粉，继续培养8h，得到酵母菌二次培养液；
40.混合料b与二次发酵基质bb按照1：5-1：7质量比混合；并且每150kg混合料b添加木质素酶3kg、酵母菌二次培养液15l、水48kg；发酵容器不加盖，于无菌房中，28℃发酵6h，然后升温至38℃培养8h。
41.优选地，步骤(5)中，
42.静止发酵条件为：30℃发酵2d。
43.优选地，嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳杆菌33℃、180r/min、培养22h制得；
44.枯草芽孢杆菌菌液为枯草芽孢杆菌33℃、180r/min、培养18h制得；
45.植物乳杆菌菌液为植物乳杆菌33℃、180r/min、培养18h制得；
46.丁酸梭菌菌液为丁酸梭菌33℃、180r/min、培养22h制得；
47.酵母菌液为酵母菌33℃、180r/min、培养18h制得。
48.优选地，制备各菌菌液时所用培养基成分如下：酵母浸膏质量分数1％，蛋白胨质量分数1％，葡萄糖质量分数4％。
49.综上所述，本发明制备的中药发酵饲料添加剂赖氨酸含量高，将其添加到奶牛饲料中，可提高营养供应，降低热应激反应，提高奶牛高温季节产奶量。
具体实施方式
50.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
51.实施例中，膨润土购自石家庄光宁矿产品有限公司；蛭石购自灵寿县宁博矿产品有限公司；党参、炙甘草购自河北百草康神药业有限公司；黄芪购自山西振东道地黄芪产业有限公司；白术购自天台高山白术公司肉苁蓉；栀子购自安徽省亳州市药材总公司药材公司；豆粕购自山东富立恒新材料科技有限公司；淫羊藿购自亳州市佰林堂药业有限公司；槐花购自临朐县华懋饲料有限公司；纤维素酶cel-01型购自夏盛集团；木质素酶1000u工业级购自山东诺杰生物科技有限公司；稀土购自苏州市正德稀土材料有限公司；嗜酸乳杆菌购自中科嘉亿；酿酒酵母、枯草芽孢杆菌购自沧州旺发生物技术研究所有限公司；丁酸梭菌购自河南新仰韶生物科技有限公司；植物乳杆菌购自潍坊瑞辰生物技术有限公司。
52.实施例1
53.一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法：
54.1.粉碎
55.蛭石、党参、炙甘草、黄芪、白术、栀子、豆粕、淫羊藿、槐花等用水滴式粉碎机粉碎过80目筛，得到党参粉、炙甘草粉、黄芪粉、白术粉、栀子粉、豆粕粉、淫羊藿粉、槐花粉、蛭石粉。
56.2.菌液制备
57.菌种活化培养基：酵母浸膏1％(w/w)，蛋白胨1％(w/w)，葡萄糖4％(w/w)。
58.菌液制备：于500ml三角瓶装入活化培养基300ml，接入菌种在33℃下培养，转速180r/m；酵母菌培养18h，得到酵母菌液；植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌培养18h，嗜酸乳杆菌和丁酸梭菌培养22h，分别得到植物乳杆菌液，枯草芽孢杆菌菌液，嗜酸乳杆菌菌液和丁酸梭菌菌液。其中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌三角瓶用多层保鲜膜包裹瓶口，然后用透明胶带缠绕保鲜膜，确保不漏气或进气。
59.3.粉料混合
60.按照槐花粉：膨润土：蛭石粉：稀土：豆粕粉：葡萄糖重量比为8：1：1：1：2：1混合均匀，得到混合料a。
61.按照党参粉：炙甘草粉：黄芪粉：白术粉：栀子粉：淫羊藿粉重量比为0.2：3：1：1.5：2：0.2混合均匀，得到混合料b。
62.4.初次发酵
63.取30kg混合料a加入嗜酸乳杆菌菌液20l，枯草芽孢杆菌菌液20l，纤维素酶1kg，木质素酶2kg，灭菌的蒸馏水200kg，装入200l塑料桶中，每个塑料桶装入130-160l，六层纱布封口，共转入2桶。
64.37℃静止发酵36h；去掉纱布，盖上密封盖，37℃静止发酵48h；去掉密封盖，再加入纤维素酶1kg，木质素酶2kg，六层纱布封口，28℃静止发酵36h，得到初次发酵醪液aa。
65.5.二次发酵
66.取120kg混合料b与480kg混合料a(1：4的比例)混合，得到混合料aa2，混合料aa2为600kg，与初次发酵醪液aa混合，加入植入乳杆菌菌液5l，丁酸梭菌菌液3l，酵母菌液10l，混合均匀，得到二次发酵料。
67.以不加盖的不锈钢槽(3mx1mx2m)作为发酵槽，将二次发酵料全部装入发酵槽，放入无菌房中，35℃静止发酵36h，得到二次发酵基质bb。
68.6.三次发酵
69.取15l酵母菌液加入质量分数0.2％的蛭石粉和质量分数0.1％的膨润土，加入质量分数1％的蛋白胨和质量分数1％的葡萄糖，装入200l塑料桶中，6层纱布封口，在28℃培养16h，然后加入质量分数0.2％的黄芪粉，继续培养8h,得到酵母菌二次培养液。
70.混合料b取150kg，与二次发酵基质bb混合，加入木质素酶3kg，15l酵母菌二次培养液，加入灭菌自来水48kg，混合均匀，装入不锈钢发酵槽，放入无菌房中，在28℃培养6h，然后升温到38℃培养8h，发酵结束，得到发酵基质cc。
71.7.呼吸袋发酵
72.将发酵基质cc，装入呼吸袋(饲料发酵呼吸袋，25kg，51
×
81
×
10丝，温州创佳包装材料有限公司)，每袋装15kg，塑料封口机(塑料袋封口机，东莞市祥搏机电设备有限公司)热封口。30℃发酵2天，得到中药发酵饲料添加剂。
73.8.品质分析
74.参照gb/t18246-2000将样品酸解，再用茚三酮法测定中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量；赖氨酸含量的值以样品水分为10％计算，测得中药发酵饲料添加剂中的赖氨酸含量为0.48％。
75.选取年龄4-5岁、体重、胎次、泌乳期、乳中体细胞相似的，健康的黑白花牛24头，随机分成两组：对照组和实验组。在湖北实验基地实验，6月中旬开始实验，每天喂食后，根据投料和剩余料的差，计算饲料摄入量。对照组不添加中药发酵饲料添加剂，实验组按照饲料质量添加0.2％的中药发酵饲料添加剂，实验周期为56天。发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表1。
76.表1
[0077][0078]
对比例1
[0079]
整个生产过程不添加木质素酶，其它同实施例1，测得中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量为0.39％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表2。
[0080]
表2
[0081][0082]
对比例2
[0083]
30kg混合料a加入嗜酸乳杆菌菌液20l，枯草芽孢杆菌菌液20l，纤维素酶2kg，木质素酶4kg，灭菌的蒸馏水200kg,不进行初次发酵，直接与混合料aa2600kg混合均匀，进行发酵，发酵条件与实施例1二次发酵条件完全相同，后续步骤同实施例1，测得中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量为0.31％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表3。
[0084]
表3
[0085][0086]
对比例2
[0087]
除初次发酵不加入嗜酸乳杆菌菌液外，其它同实施例1，测得中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量为0.46％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表4。
[0088]
表4
[0089][0090]
对比例3
[0091]
除三次发酵中的酵母菌液中不加入0.2％的蛭石粉和0.1％膨润土，其它同实施例1，测得中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量为0.41％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表5。
[0092]
表5
[0093][0094][0095]
对比例4
[0096]
除不进行三次发酵，二次发酵基质bb，直接加入15l酵母菌液(含0.2％的蛭石粉和0.1％膨润土，1％蛋白胨和1％葡萄糖，0.2％黄芪粉)，150kg混合料b，混合均匀，直接进行呼吸袋发酵外，其它同实施例1，结果测得中药发酵饲料添加剂中赖氨酸含量为0.37％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表6。
[0097]
表6
[0098][0099]
对比例5
[0100]
不添加槐花，槐花用等量的豆粕代替，其余同实施例1，测得赖氨酸含量为1.3％，按照实施例1方法将其应用于饲料添加，发酵中药添加剂对奶牛每天产奶性能的影响见表7。
[0101]
表7
[0102][0103][0104]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0105]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对上述实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

技术特征：
1.一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)粉料混合：将槐花粉、膨润土、蛭石粉、稀土、豆粕粉、葡萄糖混合，得到混合料a；将党参粉、炙甘草粉、黄芪粉、白术粉、栀子粉、淫羊藿粉混合，得到混合料b；(2)初次发酵：取混合料a，接种嗜酸乳杆菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液，并添加纤维素酶、木质素酶和水，静止发酵，得到初次发酵醪液aa；(3)二次发酵：另取混合料a，与混合料b混合，得到混合料aa2；混合料aa2与初次发酵醪液aa混合后，接种植物乳杆菌菌液、丁酸梭菌菌液、酵母菌液，静止发酵，得到二次发酵基质bb；(3)三次发酵：另取酵母菌液，加入蛭石粉、膨润土、蛋白胨和葡萄糖，过夜培养，然后加入黄芪粉，继续培养，得到酵母菌二次培养液；另取混合料b，与二次发酵基质bb混合，加入木质素酶、酵母菌二次培养液，静止发酵，得到发酵基质cc；(4)呼吸袋发酵：将发酵基质cc装入呼吸袋，封口后静止发酵，得到中药发酵饲料添加剂。2.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，槐花粉、膨润土、蛭石粉、稀土、豆粕粉、葡萄糖质量比为8：1：1：1：2：1；党参粉、炙甘草粉、黄芪粉、白术粉、栀子粉、淫羊藿粉质量比为0.2：3：1：1.5：2：0.2。3.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，静止发酵程序为：发酵容器纱布封口，37℃发酵36h；去掉纱布，密封盖封口，37℃发酵48h；去掉密封盖，加入纤维素酶、木质素酶，纱布封口，28℃发酵36h。4.根据权利要求3所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，静止发酵前每30kg混合料a加入嗜酸乳杆菌菌液20l，枯草芽孢杆菌菌液20l，纤维素酶1kg，木质素酶2kg，水200kg；去掉密封盖后，每30kg混合料a加入纤维素酶1kg，木质素酶2kg。5.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，
步骤(3)中，发酵容器不加盖，于无菌房中，35℃发酵36h。6.根据权利要求5所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，混合料a与混合料b按1:4质量比混合得到混合料aa2；混合料aa2与初次发酵醪液aa按照1.5：1-2.5：1质量比混合；并且每600kg混合料aa2添加植物乳杆菌菌液5l、丁酸梭菌菌液3l、酵母菌液10l。7.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，酵母菌液中加入质量分数为0.2％的蛭石粉、质量分数为0.1％的膨润土、质量分数为1％的蛋白胨和质量分数为1％的葡萄糖，发酵容器纱布封口，28℃培养16h，然后加入质量分数为0.2％的黄芪粉，继续培养8h，得到酵母菌二次培养液；混合料b与二次发酵基质bb按照1：5-1：7质量比混合；并且每150kg混合料b添加木质素酶3kg、酵母菌二次培养液15l、水48kg；发酵容器不加盖，于无菌房中，28℃发酵6h，然后升温至38℃培养8h。8.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，静止发酵条件为：30℃发酵2d。9.根据权利要求1所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，嗜酸乳杆菌菌液为嗜酸乳杆菌33℃、180r/min、培养22h制得；枯草芽孢杆菌菌液为枯草芽孢杆菌33℃、180r/min、培养18h制得；植物乳杆菌菌液为植物乳杆菌33℃、180r/min、培养18h制得；丁酸梭菌菌液为丁酸梭菌33℃、180r/min、培养22h制得；酵母菌液为酵母菌33℃、180r/min、培养18h制得。10.根据权利要求9所述的一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，制备各菌菌液时所用培养基成分如下：酵母浸膏质量分数1％，蛋白胨质量分数1％，葡萄糖质量分数4％。

技术总结
本发明公开了一种强营养疗热应激的中药发酵饲料添加剂的制备方法，属于生物工程技术领域；包括如下步骤：(1)粉料混合；(2)初次发酵；(3)二次发酵；(3)三次发酵；(4)呼吸袋发酵。通过本发明方法制备的中药发酵饲料添加剂赖氨酸含量高，将其添加到奶牛饲料中，可提高营养供应，降低热应激反应，提高奶牛高温季节产奶量。奶量。


技术研发人员：游锡火 王玉万 薛栋升 蒋慧 梁大明 田美华 胡燕 夏胜 王伟 任雅楠 于晶晶 刘佳丽 孙赫 孙哲 刘艳辉 曾徐浩 张耀 齐义清 沈力 游王丹
受保护的技术使用者：中农华威生物制药（湖北）有限公司
技术研发日：2021.11.29
技术公布日：2022/3/8