维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用的制作方法

1.本发明属于生物医药技术领域，涉及药物维替泊芬的一种新应用，具体涉及维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用。


背景技术：

2.癌性疼痛广泛存在于癌症患者中，75％-90％的转移性或晚期癌症患者会经历显著的癌痛。在某些癌症(如胰腺癌、头颈癌、骨肉瘤)中，疼痛源于癌症的原发部位。然而，在许多常见的癌症中，例如乳腺、前列腺、肾脏和肺，这些肿瘤会迅速转移到身体的多个骨骼，包括椎骨、肋骨、髋关节、股骨和胫骨。由于转移部位多，这导致了显著的骨痛。
3.癌性疼痛主要表现为中重度的自发性疼痛，同时伴随着一系列对外界刺激的异常痛觉，如触诱发痛，机械、热、冷觉痛敏等。随着世界卫生组织三阶梯治疗原则和nccn成人癌痛指南的普及应用，通过药物治疗，比如甾体类镇痛药、曲马多、阿片类镇痛药等，但存在着药物安全性、成瘾性和耐受性等问题。癌性疼痛在临床治疗上没有明确的针对性的治疗靶点，缺乏有效的镇痛方法和镇痛药物，临床效果较差，80％的肿瘤患者疼痛症状可以通过规范有效的治疗得到缓解，但仍有20％的难治性癌痛，常规药物难以奏效。
4.cn101636391b公开了一种用于神经病理性疼痛的预防剂和/或治疗剂，其使用2-[(取代茚-7-基氧基)甲基]吗啉或其可药用的盐作为有效成分，用于下列疼痛的预防剂和/或治疗剂：异常性疼痛、痛觉过敏、感觉过敏、自发痛、癌性疼痛、三叉神经痛、幻肢痛、带状疱疹后疼痛、纤维肌痛综合征、腰及下肢疼痛、丘脑痛、非典型性面痛、伴随脊髓损伤的疼痛、伴随多发性硬化症的疼痛。
[0005]
cn108379263a公开了一种治疗癌性疼痛的药物组合物，所述药物组合物包括以下活性成分：地西泮、氨基比林、安替比林、巴比妥。地西泮、氨基比林、安替比林、巴比妥按一定的配比联合使用时，协同增效，对于治疗癌性疼痛方面有显著的止痛效果，具有用药剂量少、药物的毒副作用低、患者的依从性高的优点，能提高癌性患者的生活质量，降低治疗成本。
[0006]
但是目前，针对癌性疼痛的治疗策略还很少，因此，开发一种对治疗癌性疼痛具有针对性，且疗效显著的药物是十分有意义的。
[0007]
verteporfin，中文名维替泊芬，其化学名为9-甲基(i)和13-甲基(ii)反式-(
±
)-18-乙烯-4,4a-二氢-3,4-双(甲酯基)-4a,8,14,19-四甲基-23h,25h-苯卟啉-9,13-二丙酯。在临床上，verteporfin被用于治疗老年性视黄斑病变。us2017043015(a1)公布了角膜胶原与维替泊芬交联治疗眼疾的方法，使用基于椎体泊芬的光动力疗法(pdt)来增加角膜生物力学强度的组成和方法，更具体地，描述了在角膜组织中交联胶原蛋白的组合物和方法，这些组合物和方法对治疗角膜扩张失调很有用。
[0008]
同时cn111956643a公布了维替泊芬用于制备肥胖症药物的应用，实验证明了维替泊芬通过降低脂肪组织含量进而缓解肥胖症，为临床治疗病理性肥胖症提供实验基础。但并未有verteporfin缓解疼痛尤其是癌痛的相关报道。


技术实现要素：

[0009]
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供药物维替泊芬的一种新应用，具体提供维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用。
[0010]
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
[0011]
第一方面，本发明提供维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用。
[0012]
维替泊芬，其化学名为9-甲基(i)和13-甲基(ii)反式-(
±
)-18-乙烯-4,4a-二氢-3,4-双(甲酯基)-4a,8,14,19-四甲基-23h,25h-苯卟啉-9,13-二丙酯。
[0013]
本发明首次发现了维替泊芬具有抗癌性疼痛的功效，能够应用于制备抗癌性疼痛的药物。维替泊芬是通过抑制脊髓背角yap和taz的表达、聚集和入核来实现上述功能的，其中，yap为yes激酶相关蛋白，taz为转录联合激活因子。肿瘤压迫或者浸润导致的神经损伤，促使yap或taz在脊髓背角的表达和聚集，引起中枢敏化，产生疼痛。yap或taz在癌性疼痛的发生和发展过程中发挥类似于“开关”的作用，含量增加会导致疼痛，降低会缓解疼痛。因此，维替泊芬是一种很具有潜力的抗癌性疼痛的靶向药物，且在治疗过程中具有针对性，疗效显著。
[0014]
优选地，所述癌性疼痛包括在癌症早期由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的疼痛、在癌症中晚期由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的疼痛。
[0015]
本发明首次发现维替泊芬不仅可以用于早期癌症，延缓癌性疼痛的发生和发展，也可以应用于中晚期癌症，缓解癌性疼痛，应用范围广。
[0016]
优选地，所述癌性疼痛的表现形式包括机械痛敏、热痛敏、自发性疼痛、触诱发痛。
[0017]
优选地，所述维替泊芬抑制脊髓背角的yap和taz两种蛋白的表达。
[0018]
第二方面，本发明提供一种抗癌性疼痛的药物，所述抗癌性疼痛的药物包括维替泊芬。
[0019]
优选地，所述药物的剂型为药剂学上可接受的任意一种剂型，例如片剂、散剂、混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、灌肠剂、乳剂等。
[0020]
优选地，所述药物还包括药剂学上可接受的药用辅料，所述药用辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、ph调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
[0021]
所述至少两种的组合例如稀释剂和赋形剂的组合、乳化剂和助溶剂的组合、填充剂和粘合剂和润湿剂的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
[0022]
维替泊芬可以负载于常用药用载体上作为抗癌性疼痛的药物，实现更好的生物相容性、生物安全性和药效。本发明所所涉及的抗癌性疼痛的药物可单独给药也可以与辅料搭配做成适当的剂型进行给药。
[0023]
第三方面，本发明还提供维替泊芬在制备yap蛋白抑制剂或taz蛋白抑制剂中的应用。
[0024]
第四方面，本发明还提供维替泊芬在制备以非诊断和/或治疗为目的的yap蛋白抑制剂或taz蛋白抑制剂中的应用。
[0025]
本发明研究发现在鞘内注射维替泊芬verteporfin(缩写为vp)后，癌症模型大鼠脊髓背角yap和taz的靶标基因ctgf表达显著降低，基于这一现象，维替泊芬还可以用于制
备以非诊断和/或治疗为目的的yap蛋白抑制剂或taz蛋白抑制剂，用于其他的科研实验中，也具有长远的意义。
[0026]
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
[0027]
本发明提供了维替泊芬的药学新应用，本发明首次发现了维替泊芬具有抗癌性疼痛的功效，能够应用于制备抗癌性疼痛的药物。维替泊芬是通过抑制脊髓背角yap和taz的表达、聚集和入核来实现上述功能的。维替泊芬是一种很具有潜力的抗癌性疼痛的靶向药物，且在治疗过程中具有针对性，疗效显著，副作用小，耐受性低，为研究癌性疼痛的治疗策略提供了理论依据，为制备新的治疗癌性疼痛的药物提供了一个嵌入点。
附图说明
[0028]
图1是实施例1中各组大鼠的机械痛敏检测结果统计图；
[0029]
图2是实施例2中各组yap和taz表达量变化结果统计图；
[0030]
图3是实施例2中各组yap和taz的免疫蛋白印迹图；
[0031]
图4是实施例3中各组大鼠的机械痛敏检测结果统计图；
[0032]
图5是实施例3中各组大鼠的脚掌落地时间结果统计图；
[0033]
图6是实施例3中各组大鼠的跛行评分结果统计图；
[0034]
图7是实施例3中各组大鼠脊髓背角yap/taz的靶标基因ctgf表达量统计图；
[0035]
图8是实施例4中各组大鼠的机械痛敏检测结果统计图。
具体实施方式
[0036]
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
[0037]
以下实施例选用的大鼠为sd(sprague dawley，斯普拉格-道利)大鼠。
[0038]
以下实施例涉及的组别包括：tci组(即胫骨骨髓腔接种肿瘤细胞组)、sham组(即假手术组，大鼠胫骨骨髓腔接种已经灭活的肿瘤细胞)、tci+维替泊芬组(即接种肿瘤细胞组给予维替泊芬的注射)。
[0039]
以下实施例涉及tci模型和sham模型的制作，其制作方法具体如下：向sd大鼠腹腔注射walker 256乳腺癌细胞，14天后取荷瘤鼠腹水，并1000rpm离心5min，弃上清，然后用无菌的pbs缓冲液漂洗(1000rpm
×
5min)2-3遍，最后用pbs缓冲液重悬肿瘤细胞浓度至1
×
105个/μl，置于冰盒内备用。另取调整好浓度的细胞在沸水中水浴10min，作为灭活细胞。大鼠经异氟烷麻醉后，取仰卧位固定。在左侧胫骨中上1/3处，用75％乙醇消毒，沿胫骨长轴切开皮肤，切口约1cm，分离肌肉，暴露胫骨骨面。用1ml注射器的针头在骨面上钻一小孔，然后用20μl的微量注射器经小孔进入胫骨骨髓腔，缓慢注入5μl肿瘤细胞，建立tci模型；而向sham模型大鼠注入等体积的灭活细胞。注射完毕后留针约30s，然后拔出微量注射器。针孔处用无菌骨蜡和牙科水泥封闭，在伤口处涂抹适量红霉素粉，然后缝合。整个手术过程均按照无菌要求进行。即成功建立tci模型和sham模型。
[0040]
以下实施例涉及机械痛敏的检测，机械痛敏可以反映出大鼠对机械刺激的敏感程度，其值越低，代表大鼠对机械刺激的敏感程度越强，其检测方法具体如下：机械痛敏使用vonfrey刺激大鼠足底皮肤，记录大鼠缩脚反射时的压力。
[0041]
实施例1
[0042]
机械痛敏的检测试验(1)
[0043]
随机将28只雄性大鼠分为tci组(22只)、sham组(6只)。分别在造模前1天、造模后1天、3天、5天、7天、10天、14天、21天时检测每组大鼠的机械痛敏，其中tci组和sham组的造模方法如上所示，机械痛敏的检测方法如上所示。
[0044]
试验结果如图1所示，大鼠在进行tci造模后，tci组机械痛敏出现下降，sham组几乎无变化，说明大鼠在接种肿瘤细胞后，会出现较为明显的癌性疼痛，且痛阈值随着时间逐渐降低。
[0045]
实施例2
[0046]
免疫蛋白印迹法检测大鼠脊髓背角yap和taz的表达(1)
[0047]
使用实施例1中完成检测的大鼠进行如下试验：分别在造模后1天、3天、5天、7天和14天时将大鼠脱颈处死，取出大鼠l
3-l5对应的脊髓片段(即脊髓的第三个、第四个和第五个腰节片段)，用免疫蛋白印迹法检测脊髓背角yap和taz的表达情况。
[0048]
试验结果如图2和图3所示，tci组大鼠脊髓背角的yap和taz含量在造模后1天、3天、5天、7天和14天时均有显著增加，而sham组大鼠脊髓背角的yap和taz含量没有变化，说明大鼠在接种肿瘤细胞后，其脊髓背角的yap和taz含量会显著增加，接种灭活的肿瘤细胞不会导致大鼠脊髓背角的yap和taz含量增加。
[0049]
实施例3
[0050]
机械痛敏的检测试验(2)
[0051]
随机将18只雄性大鼠分为tci+peg400组、sham组、tci+维替泊芬组，每组6只，预饲7天。分别在造模前1天、造模后1天、3天、5天、7天、9天、12天、14天、21天时检测每组大鼠的机械痛敏。其中sham组的造模方法与实施例1相同，在造模后第3天向tci+peg400组和tci+维替泊芬组大鼠鞘内分别注射20μl溶剂peg400和20μl维替泊芬(每只大鼠给予0.45mg溶解在20μl peg400的维替泊芬)，连续给药3天。机械痛敏的检测方法与实施例1相同。
[0052]
试验结果如图4所示，大鼠在进行tci造模后，tci组大鼠机械痛敏出现下降，sham组大鼠几乎无变化，而在造模早期鞘内注射维替泊芬可以显著抑制tci组大鼠机械痛敏的下降，说明维替泊芬能够显著抑制癌性疼痛发生和发展，而注射溶剂peg400并不影响痛阈。
[0053]
大鼠运动诱发痛行为评价
[0054]
具体操作为：在造模后第14天评测实施例3中大鼠运动诱发痛行为。将大鼠置于一个清洁的有机玻璃盒子(100
×
60
×
40cm)中，轻抚患肢，观察并记录两分钟内大鼠在运动过程中抬高患肢不用的时间。同时根据大鼠运动时患肢的使用情况予以评分：0分-正常使用患肢；1分-轻微跛行；2分-明显跛行；3分-有时使用患肢；4分-完全不用患肢。统计结果如图5和图6所示。
[0055]
脊髓背角yap/taz下游基因表达量检测试验
[0056]
具体操作为：在造模后第14天大鼠经异氟烷麻醉后，心脏灌注0.1m的pbs，取l3-l5脊髓背角，用rna提取试剂盒提取总rna，并反转录成cdna，用q-pcr方法检测ctgf基因表达水平，结果如图7所示。相对于sham组，tci组大鼠脊髓背角yap/taz下游基因表达量在造模后14天时有显著增加，而tci+维替泊芬组表达量大鼠脊髓背角yap/taz下游基因表达量相对tci组显著减少。
[0057]
实施例4
[0058]
机械痛敏的检测试验(3)
[0059]
随机将12只雄性大鼠分为tci+peg400组、tci+维替泊芬组，每组6只，预饲7天。分别在造模前1天、造模后3天、5天、7天、9天、11天、13天、16天、21天时检测每组大鼠的机械痛敏。在造模后第7天向tci+peg400组和tci+维替泊芬组大鼠鞘内分别注射20μl溶剂peg400和20μl维替泊芬(每只大鼠给予0.45mg溶解在20μl人工脑脊液的维替泊芬)，连续给药3天。机械痛敏的检测方法与实施例1相同。
[0060]
试验结果如图8所示，大鼠在进行tci造模后，tci+peg400组大鼠机械痛敏出现下降，而在造模中晚期鞘内注射维替泊芬可以显著逆转tci大鼠机械痛敏的下降，说明维替泊芬能够显著抑制癌性疼痛的发展，而注射peg400并不影响痛阈。
[0061]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0062]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0063]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

技术特征：
1.维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述癌性疼痛包括在癌症早期由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的疼痛、在癌症中晚期由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的疼痛。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述癌性疼痛的表现形式包括机械痛敏、热痛敏、自发性疼痛、触诱发痛。4.如权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述维替泊芬抑制脊髓背角的yap和taz两种蛋白的表达。5.一种抗癌性疼痛的药物，其特征在于，所述抗癌性疼痛的药物包括维替泊芬。6.如权利要求5所述的抗癌性疼痛的药物，其特征在于，所述药物的剂型为药剂学上可接受的任意一种剂型。7.如权利要求5或6所述的抗癌性疼痛的药物，其特征在于，所述药物还包括药剂学上可接受的药用辅料，所述药用辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、ph调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。8.维替泊芬在制备yap蛋白抑制剂或taz蛋白抑制剂中的应用。

技术总结
本发明涉及维替泊芬在制备抗癌性疼痛的药物中的应用。本发明提供了维替泊芬的药学新应用，本发明首次发现了维替泊芬具有抗癌性疼痛的功效，能够应用于制备抗癌性疼痛的药物。维替泊芬是通过抑制脊髓背角YAP和TAZ的表达、聚集和入核来实现上述功能的。维替泊芬是一种很具有潜力的抗癌性疼痛的靶向药物，且在治疗过程中具有针对性，疗效显著，副作用小，耐受性低，为研究癌性疼痛的治疗策略提供了理论依据，为制备新的治疗癌性疼痛的药物提供了一个嵌入点。嵌入点。嵌入点。


技术研发人员：宋学军 廖华宝
受保护的技术使用者：北京市肿瘤防治研究所
技术研发日：2022.01.21
技术公布日：2022/3/8